核内におけるM-RasによるRNA編集の制御機構の解明

阐明细胞核内M-Ras对RNA编辑的控制机制

• 批准号: 17657041
• 负责人: 遠藤 剛
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17657041/
• 关键词: M-Ras; ADAR1; ADAR2; RNA編集; グルタミン酸受容体; セロトニン受容体

RNA特異的アデノシンデアミナーゼ(ADAR)は特定の蛋白質のpre-mRNAにおいてA-I変換を引き起こすことにより,RNA編集を行う酵素である.しかしこれまでADAR活性の制御機構はまったく不明であった.私たちはADAR1が低分子量G蛋白質M-Rasの特異的標的蛋白質であることを見出した.そこで本研究では,M-RasがADARのRNA編集活性をどのように制御しているか,そしてM-RasがADARの機能をどのようなシグナル伝達経路で制御しているかを明らかにすることを目的とした.M-Rasは活性状態の時にのみADAR1に結合することが,酵母two-hybridアッセイとpull-downアッセイで示された.また活性状態にかかわらずADAR2に結合した.一方,他のRasはADARには結合しなかったことから,ADARの制御はM-Rasに特異的な機能であると考えられる.ADAR1(p150)は細胞質に局在していたのに対し,ADAR1(p110)とADAR2は核小体に局在していた.NIH3T3細胞にトランスフェクトしたADAR2はグルタミン酸受容体GluR2のQ/R部位のRNA編集を行った.この細胞にさらに野生型,恒常的活性変異体,ドミナントネガティブ変異体M-Rasを発現させたが,いずれの場合にもRNA編集は影響を受けなかった.またNIH3T3細胞にトランスフェクトしたADAR1(p110)はセロトニン受容体5-HT2cRのA, B, C, DサイトのRNA編集を行った.この細胞にさらに野生型,恒常的活性変異体,ドミナントネガティブ変異体M-Rasを発現させたが,いずれの場合にもRNA編集は影響を受けなかった.またこれらのM-Rasの発現はADARI(p110)の核小体への局在化に影響しなかった.以上の結果から,M-RasはADAR2によるGluR2のQ/R部位のRNA編集やADAR1(p110)による5-HT2cRのA, B, C, DサイトのRNA編集にはかかわっていないようである.しかしインターフェロン誘導性のADAR1(p150)によるウイルスRNA編集を制御している可能性が考えられる.

RNA特异性腺苷脱氨酶（ADAR）是一种通过在特定蛋白的前MRNA中引起A-I转化来进行RNA编辑的酶。但是，直到现在，ADAR活性调节的机制尚未知道。我们发现ADAR1是低分子量G蛋白M-RAS的特定靶蛋白。在这项研究中，我们旨在阐明M-RAS如何调节ADAR的RNA编辑活性以及哪些信号通路M-RAS调节ADAR功能。结果表明，仅当M-Ras在酵母两杂交和下拉测定中活跃时才结合ADAR1。无论其性状况如何，它都会约束ADAR2。但是，其他RAS与ADAR没有结合，因此人们认为ADAR的调节是M-RAS特有的函数。 ADAR1（P150）位于细胞质中，而ADAR1（P110）和ADAR2定位于核仁。转染到NIH3T3细胞中的ADAR2在谷氨酸受体Glur2的Q/R位点进行了RNA编辑。该细胞进一步表达了野生型，组成型活性突变体和显性阴性突变体M-RAS，但在任何一种情况下，RNA编辑都不受到影响。转染到NIH3T3细胞中的ADAR1（P110）为A，而5-羟色胺受体5-HT2CR为A，在B，C和D位点进行RNA编辑。在野生型中进一步表达细胞，组成性活性突变体和显性阴性突变体M-RAS，但在任何一种情况下，RNA编辑都不受到影响。此外，这些M-RAS的表达不会影响Adari（p110）对核仁的定位。从上述结果中，似乎M-RAS通过ADAR2在GLUR2的Q/R位点进行RNA编辑，或通过ADAR1的A，B，C和D位点在A，B，C，C和D位点进行RNA编辑（P110）。但是，它可能通过ADAR1（P150）调节干扰素诱导的病毒RNA编辑。

项目成果

M-Rasによる骨形成方法

使用M-Ras的骨形成方法

• 发表时间: 2007

DA-Rafl, a competent intrinsic dominant-negative antagonist of Ras-ERK pathway, is required for myogenic differentiation

DA-Rafl 是 Ras-ERK 通路的一种有效的内在显性失活拮抗剂，是肌原性分化所必需的

• 发表时间: 2007
• 期刊: J. Cell Biol. 177(印刷中)
• 作者: Yokoyama;T.
• 通讯作者: T.

Role of Src-family kinases in formation and trafficking of macropinosomes

• DOI: 10.1002/jcp.20931
• 发表时间: 2007-04-01
• 期刊: JOURNAL OF CELLULAR PHYSIOLOGY
• 影响因子: 5.6
• 作者: Kasahara, Kousuke;Nakayama, Yuji;Yamaguchi, Naoto
• 通讯作者: Yamaguchi, Naoto

Assays for functional properties of Rab34 in macropinosome formation

Rab34 在巨脂质体形成中的功能特性测定

• 发表时间: 2005
• 期刊: Methods Enzymol. 403
• 作者: Sun;P.
• 通讯作者: P.

形と運動を司る細胞のダイナミクス(実験医学増刊)

细胞控制形状和运动的动力学（实验医学特别版）

• 发表时间: 2006
• 作者: Ishizaki K;Yamada A;Yoh K;Nakano T;Shimohata H;Maeda A;Fujioka Y;Morito N;Kawachi Y;Shibuya K;Otsuka F;Shibuya A;Takahashi S;竹縄 忠臣
• 通讯作者: 竹縄 忠臣