長期放射線被ばくの細胞影響および耐性機構解明へ向けた基礎的研究

旨在阐明长期辐射暴露对细胞的影响和抵抗机制的基础研究

基本信息

批准号：
17651024
负责人：
福本学
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17651024/
关键词：
放射線耐性放射線治療二次癌化学療法交差耐性

项目摘要

癌の放射線療法は機能温存の面で優れているため、手術適応のない症例や補助療法として重要であり、適応は拡大している。放射線治療後の局所再発が予後を決定する大きな因子であるため、腫瘍の再発する可能性が治療前に予測できれば、治療法の決定への寄与は画期的である。さらに、二次癌発症の可能性などの問題も浮上してきている。本研究は、放射線耐性と局所再発に関する分子マーカーと、放射線療法の分子標的を探索することを最終目標としている。我々は5年半以上にわたってヒト肝癌細胞株HepG2に0.5Gy/12hrのX線照射を行い、1,900Gy以上の集積線量となった亜株を3系統樹立した。そのうちのHepG2-89株から耐性株89-60株を樹立した。マイコプラズマ感染が発覚したため、除菌、再実験を行っている。さらにHepG2細胞は免疫不全マウスに可移植性でないため、新たに口腔癌であるSAS細胞についても同様の実験を始め、SASからも放射線耐性細胞を樹立し、HepG2-89-60とともに2Gy/day照射で維持している。その結果以下の知見を得た。1.放射線耐性を検出するために、毎日X線2Gy照射によって30日後にも生残するか否かで検討する方法を確立した。2.SAS細胞では、癌抑制遺伝子p53に変異のある方が放射線耐性であるが、上記のような耐性細胞の樹立には変異の有無は無関係であった。3.昨年クローニングしたCDDP耐性に関与した遺伝子を導入した細胞を作製した。CDDPと放射線交差耐性が存在するか、すればこの遺伝子が寄与しているかの解析を始める。4.GeneFishing法を用い、長期X線被ばくによって発現亢進・低下している遺伝子断片を5個ずつクローニングした。メチル化特異的PCR法によって、メチル化の変化したゲノムDNA断片を17個クローニングした。今後、放射線長期被ばくとこれらがどう関係するかを解析する。

由于癌症放射疗法在功能保护方面非常好，因此重要的是不适用于手术程序和辅助治疗的病例，并且指示正在扩大。放射治疗后的局部复发是确定预后的主要因素，因此，如果可以在治疗前预测肿瘤复发的可能性，则其对治疗决策的贡献是开创性的。此外，出现了次要癌症的可能性等问题。这项研究的最终目的是探索用于辐射抗性和局部复发的分子标记，以及用于放射治疗的分子靶标。我们在5。5年以上，以0.5 Gy/12小时对人肝癌细胞系HEPG2进行了X射线照射，并建立了三种亚菌株，累积剂量为1,900 Gy或更多。其中，通过HEPG2-89菌株建立了89-60个抗性菌株。由于已经发现了支原体感染，因此正在进行灭菌和重新检查。此外，由于HEPG2细胞无法移植到免疫缺陷的小鼠，因此已经开始在SAS细胞，一种新的口腔癌和SAS的耐药细胞上进行类似的实验，该细胞也通过2GY/DAY辐照以及HEPG2-89-60维持。结果，获得了以下发现。 1。为了检测辐射电阻，我们已经建立了一种方法来确定该产品在每天用2GY X射线照射后30天生存。 2。在SAS细胞中，肿瘤抑制基因p53中的突变更耐辐射，但是突变的存在或不存在与上述抗性细胞的建立无关。 3。产生的细胞已被涉及CDDP耐药性基因转染的基因克隆。我们开始分析是否存在CDDP和辐射交叉抗性，如果是，该基因是否有助于。 4。使用基因保存方法，将长期X射线暴露增加或减少的五个基因片段一一克隆。通过甲基化特异性PCR克隆甲基化改变的17个基因组DNA片段。将来，我们将分析这些将与长期辐射暴露有关。