モデルラットを用いた新生児脳低温療法の臨床応用のための分子生物学的研究

模型大鼠新生儿脑冷冻治疗临床应用的分子生物学研究

基本信息

批准号：
16659286
负责人：
伊藤雅之
金额：
$ 2.11万
依托单位：
National Center of Neurology and Psychiatry
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659286/
关键词：
脳低温療法新生児モデルラット遺伝子発現 DNAチップ

项目摘要

実験計画に基づいて、遺伝子発現解析および組織学的評価を行った。1.方法と結果(1)遺伝子発現解析:前年度の実験結果から、神経成長因子関連遺伝子とインターロイキン、ケモカイン関連遺伝子において、低体温群と対照群との間で有意な発現上昇がみられた。これら全ての遺伝子についてreal-time PCRを行い、神経成長因子関連遺伝子に着目した結果、グリア細胞由来神経成長因子(glial derived neuronal growth factor ; GDNF)が発現差を認めた。(2)組織学的検索:作製してある新生仔低体温モデルラットの凍結切片を作成し、HE染色とNissl染色、および抗GDNF抗体による免疫組織化学とウエスタンブロットを行った。染色標本による検討では、低体温群と対照群との間で明らかな差はなかった。しかし、ウエスタンブロットによるGDNFの発現は、低体温群で有意に上昇していた。2.考察新生仔低体温モデルラットでは、形態学的な脳損傷はないにも関わらず、多くの遺伝子でその発現の挙動が異なっていた。その中から、GDNFを見出した。GDNFが低酸素虚血負荷動物の中枢神経系において、発現していることが既に報告されている。臨床的にヒト新生児仮死の低体温療法の病態を考えると、低体温による高GDNFが、新生児の低酸素性虚血性脳障害に治療的影響を及している可能性が考えられる。今回得られた知見から、BDNFによるin vitroおよびin vivoで治療的研究を進める必要がある。

根据实验设计进行基因表达分析和组织学评估。 1.方法与结果（1）基因表达量分析：根据前一年的实验结果，低温组和低温组神经生长因子相关基因、白细胞介素、趋化因子相关基因的表达量显着增加。对照组。我们对所有这些基因进行了实时 PCR，并重点关注神经生长因子相关基因，结果发现胶质细胞源性神经生长因子 (GDNF) 存在差异表达。 (2)组织学检查：制备新生低温模型大鼠冰冻切片，进行HE染色、尼氏染色、抗GDNF抗体免疫组化和Western blotting。使用染色标本进行检查显示低温组和对照组之间没有明显差异。然而，Western blot检测显示低温组GDNF的表达显着增加。 2、讨论新生低温模型大鼠虽然没有出现形态学脑损伤，但许多基因的表达行为存在差异。其中，GDNF被发现。据报道，GDNF在遭受缺氧缺血应激的动物的中枢神经系统中表达。考虑到临床上人类新生儿窒息低温治疗的病理，低温引起的高GDNF可能对新生儿缺氧缺血性脑损伤有治疗作用。基于此处获得的发现，有必要推进 BDNF 的体外和体内治疗研究。