改変型アデノウイルスベクターを用いたin vivo胎盤毒性評価系の構築

改良腺病毒载体构建体内胎盘毒性评价体系

• 批准号: 16659039
• 负责人: 中西 剛
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659039/
• 关键词: アデノウイルスベクター; 胎盤; 発生毒性; 内分泌撹乱作用; 種差

本研究では、医薬品等の化学物質の毒性や副作用の標的臓器として胎盤に注目し、いかなる胎盤機能(遺伝子)が変化した場合に、胎児に対してどのような影響が及ぶのかをin vivoで簡便に検討を行うことが可能な評価系の構築を最終目標としている。そこで、化学物質により変動が認められた胎盤中の遺伝子を、胎盤特異的に発現させて胎児への影響を検討するために、胎盤特異的に遺伝子を発現させるシステムの構築を比較的に容易にin vivoでの遺伝子導入が可能なアデノウイルスベクター(Ad)を用いることで行った。齧歯類胎盤のgiant cellに特異的発現するplacental lactogen(PL)IおよびIIのそれぞれ転写開始点から上流-280bpと-2643bpのDNA断片をマウスのゲノムからクローニングし、下流にルシフェラーゼ発現遺伝子を連結してレポーター遺伝子を作成した。これらの遺伝子発現をラット胎盤細胞Rcho-1細胞とマウス繊維芽細胞株であるL929細胞に発現させて比較検討したところ、プロモーター依存的にRcho-1細胞でのみ高い発現を示すことが明らかとなった。Adを用いて胎盤機能修飾モデル動物の作成を行うために、Adの胎盤への遺伝子導入効率について検討を行った。しかし静脈内投与では、野生型のAd(WT-Ad)は、肝臓での発現が顕著に高く、胎盤での発現は肝臓と比較してわずか0.1%程度であったが、この問題を解決するためにウイルスのファイバー部分にRGD配列を持たせた改変型アデノウイルスベクター(RGD-Ad)を用いて検討を行ったところ、胎盤での発現はWT-Adの約100倍に上昇した。これにより胎盤への簡便な遺伝子導入が可能となり、胎盤の遺伝子変動に伴う発生毒性評価を行うことができると考えられる。

在这项研究中，我们专注于胎盘作为药物（例如药物）的毒性和副作用的目标器官，最终目标是创建一个可以在体内轻松检查的评估系统，以确定胎儿在胎盘功能（基因）变化时会产生什么影响。因此，为了通过特异性表达胎盘中的基因来检查对胎儿的影响，胎盘中已经观察到由于化学物质而变化的，一种用于在胎盘中表达基因的系统是使用腺病毒载体（AD）进行的，该系统使用腺病毒载体（AD）进行了相对轻松地在Vivo中转移。分别从小鼠基因组克隆了胎盘泌乳基因（PL）I和II的转录起源的-280 bp和-2643 bp的DNA片段，并从小鼠基因组中克隆，并将表达荧光素酶表达基因的基因连接到下游以创建报告基因。当将这些基因表达与大鼠胎盘细胞和L929细胞中的RCHO-1细胞（小鼠成纤维细胞系）进行比较时，揭示了高表达仅以启动子依赖性方式在RCHO-1细胞中显示。为了创建用于使用AD修饰胎盘功能的模型动物，研究了AD转移到胎盘中的效率。但是，当静脉注射时给药时，肝脏中的野生型AD（WT-AD）明显更高，与肝脏相比，胎盘的表达仅为0.1％。但是，为了解决这个问题，我们使用改良的腺病毒载体（RGD-AD）在病毒的纤维部分中具有RGD序列进行了研究，其在胎盘中的表达增加了约100倍的WT-AD。这使得可以轻松地将基因转移到胎盘中，并且认为由于胎盘遗传变异而引起的发育毒性评估可以进行。