病原体感染に伴うヒラメ免疫関連遺伝子の動態解明

阐明与病原体感染相关的牙鲆免疫相关基因的动态

基本信息

批准号：
16658084
负责人：
中易千早
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Fisheries Research Agency
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度、ヒラメ白血球遺伝子768個を載せた新規DNAチップを使用し、Edwardsiella tarda感染ヒラメの白血球を解析した結果、E.tarda感染時に2倍以上発現変動する遺伝子98種類を特定した。今年度は、ヒラメで問題になっているウイルス性疾病であるVHSVの感染試験魚およびE.tardaの自然発症魚を用い、経時的に白血球RNA抽出を行い、DNAチップに反応させ、白血球の遺伝子発現量の変動を解析した。VHS人為感染後1、3および5日目にそれぞれサンプリングし、白血球を分離後、RNA抽出を行った。得られた各RNAはCy3で標識し、非感染のヒラメ白血球RNAをコントロールとしてCy5で標識し、DNAチップに競合的に反応させ、解析を行った。昨年度に得た魚病細菌E.tarda実験感染時の遺伝子発現様式と比較した結果、感染後共通で変動する遺伝子(感染症マーカー)および各々の疾病でのみ発現する遺伝子(特異マーカー)を多数同定した。さらに、これらの感染マーカー候補遺伝子を絞り込むため、養殖場で自然発症したE.tarda感染魚の白血球RNAを用いDNAチップで解析を行った。その結果、MMP13、CD11、CD45、CD146など28遺伝子がE.tarda感染マーカーとして、また、MX Protein、IL-11など24遺伝子が感染症マーカーとして利用できると考えられた。よって、これらマーカー遺伝子を載せた本チップは診断用に有用と考えられた。多くの感染症マーカーを同定することが出来たのは今後の研究を行う上で役立つと考えられる。DNAチップの特徴を考えると、今後さらに多くの遺伝子を載せ、かつサンプリング数を増やし、データーの蓄積を図ることで、精度を高めていくことが必要である。

去年，我们使用一种携带768个比目鱼白细胞基因的新型DNA芯片分析了爱德华省tarda感染的比目鱼的白细胞，并确定了98种类型的基因，其高度是tarda感染的两倍以上。今年，我们使用了感染测试鱼作为VHSV，这是一种病毒疾病，与比目鱼是一个问题，并从E. tarda中自发发作鱼，随着时间的推移提取白细胞RNA，对DNA芯片做出反应，并分析了白细胞基因表达水平的变化。分别在感染VHS后的第1、3和5天采样样品，并分离白细胞并提取RNA。每个获得的RNA都用CY3标记，未感染的比目鱼白细胞RNA用Cy5标记为对照，并对DNA芯片进行了竞争反应并进行了分析。由于比较去年感染时与鱼类病细菌E. tarda实验获得的基因表达模式，我们确定了在感染后（感染性疾病标志物）和仅在每种疾病中表达的基因（特定标记）的大量基因（特定标记）。此外，为了缩小这些潜在感染标志物的基因，使用DNA芯片在水产养殖场自发开发的E. tarda感染的鱼的白细胞RNA用于分析。结果，可以将28个基因（例如MMP13，CD11，CD45和CD146）用作感染标记，而24个基因（例如MX蛋白和IL-111）可以用作感染的标志。因此，包含这些标记基因的芯片被认为可用于诊断目的。鉴定许多传染病标志物的能力可能在进行未来的研究中很有用。考虑到DNA芯片的特征，有必要通过发布更多基因，增加样品的数量和积累数据来提高准确性。