細胞死を指標にしたエドワジエラ属細菌感染に有効な免疫賦活剤選抜法の開発

以细胞死亡为指标,开发针对爱德华氏菌感染有效选择免疫刺激剂的方法

基本信息

  • 批准号:
    22KJ3204
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.83万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 财政年份:
    2023
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2023-03-08 至 2025-03-31
  • 项目状态:
    未结题

项目摘要

エドワジエラ属細菌(Edwardsiella piscicidaおよびE. anguillarum)は、幅広い魚種に感染し、養殖業に甚大な被害を与える。本研究は、エドワジエラ属細菌感染時にどのような種類の細胞死(パイロトーシス、アポトーシスまたはネクロトーシス)が誘導または抑制されているのか、それらにより制御される自然免疫応答について明らかにし、エドワジエラ属細菌感染に対する生体防御機構について解明することを目的として実施した。2022年度の実験においては、各種細胞死の制御に関わるシステインプロテアーゼのカスパーゼファミリー遺伝子をヒラメゲノム情報から探索した。中でも哺乳類においてアポトーシスを制御するカスパーゼ3に着目し、活性を有するヒラメのカスパーゼ3(casp3aおよびcasp3b)組換えタンパク質を作製した。これら組換えタンパク質の加水分解活性を、哺乳類の各種カスパーゼに対する合成基質を用いて測定したところ、2種類のカスパーゼ3は共に哺乳類のカスパーゼ3と同様の基質であるZ-DEVD-MCAを強く加水分解した。このことから、ヒラメの2種類のカスパーゼ3は哺乳類と同様の基質加水分解活性を持ち、アポトーシスを誘導する分子であることが示唆された。次に、E. piscicidaの生菌またはホルマリン死菌(FKC)をヒラメに腹腔内注射し、その24時間および48時間後に腎臓より白血球を単離し、Z-DEVD-MCA基質を用いて細胞溶解液におけるカスパーゼ3の活性を測定した。E. piscicida生菌接種後24および48時間後の腎臓白血球におけるカスパーゼ3の活性は、対照区およびFKC接種区と比べて有意に低かった。以上のことから、E. piscicida感染によりヒラメ腎臓白血球由来カスパーゼ3活性は低下し、アポトーシスが抑制されることが推察された。
杀鱼爱德华氏菌和鳗鱼爱德华氏菌感染多种鱼类并对水产养殖造成重大损害。本研究旨在阐明爱德华氏菌感染期间诱导或抑制哪些类型的细胞死亡(细胞焦亡、细胞凋亡或坏死性凋亡),以及它们控制的先天免疫反应。本研究的目的是阐明针对这些细胞的生物防御机制。 。在2022年的实验中,我们从比目鱼基因组信息中寻找参与控制各种细胞死亡的半胱氨酸蛋白酶caspase家族的基因。其中,我们重点关注控制哺乳动物细胞凋亡的 caspase 3,并用活性比目鱼 caspase 3(casp3a 和 casp3b)创建了重组蛋白。当使用各种哺乳动物 caspase 的合成底物测量这些重组蛋白的水解活性时,两种类型的 caspase-3 都会强烈水解 Z-DEVD-MCA,这是一种与哺乳动物 caspase-3 类似的底物。这表明牙鲆体内的两种caspase-3具有与哺乳动物相似的底物水解活性,是诱导细胞凋亡的分子。接下来,将活的E. piscicida细菌或福尔马林灭活的细菌(FKC)腹腔注射到比目鱼中,24和48小时后,从肾脏中分离白细胞,并使用Z-DEVD-MCA底物制备细胞裂解物的活性。测量了 caspase 3 的含量。接种杀鱼肠球菌活菌后24小时和48小时,肾白细胞中的Caspase 3活性显着低于对照组和FKC接种组。由上可知,杀鱼肠球菌感染使来自比目鱼肾白细胞的caspase 3的活性降低,从而抑制细胞凋亡。

项目成果

期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
マルチプレックスPCRを用いたEdwardsiella属細菌の種判別
使用多重 PCR 对爱德华氏菌进行物种鉴定
  • DOI:
  • 发表时间:
    2023
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    森本和月;原川翔伍;川上秀昌;田中真二;宮本敦史;羽生和弘;中城岳;梅田剛佑;松山知正;高野倫一
  • 通讯作者:
    高野倫一
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森本 和月其他文献

メダカcGASおよびLSm14A遺伝子の構造解析および発現解析
青鳉cGAS和LSm14A基因的结构和表达分析
  • DOI:
  • 发表时间:
    2017
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    村上栞理;森本 和月;和泉幹久;河野 智哉;酒井 正博;引間 順一
  • 通讯作者:
    引間 順一

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各種エドワジエラ属細菌感染時の免疫応答の魚種間の比較
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    2023
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    $ 2.83万
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    Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
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    2020
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    $ 2.83万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows

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    $ 2.83万
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    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
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    23H02715
  • 财政年份:
    2023
  • 资助金额:
    $ 2.83万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
カスパーゼ反応場に選択的な非細胞死性の基質の包括的探索
全面寻找对 caspase 反应场具有选择性的非细胞杀伤底物
  • 批准号:
    23K05747
  • 财政年份:
    2023
  • 资助金额:
    $ 2.83万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
Analysis of lethal stress response in insects
昆虫致死应激反应分析
  • 批准号:
    22KJ0339
  • 财政年份:
    2023
  • 资助金额:
    $ 2.83万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
自己炎症のメカニズムに立脚した成人スチル病の分子病態の解明
基于自身炎症机制阐明成人斯蒂尔病的分子病理学
  • 批准号:
    22K08547
  • 财政年份:
    2022
  • 资助金额:
    $ 2.83万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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