KCC3と胃プロトンポンプとの共役による新しい塩酸分泌機構の解明

通过将 KCC3 与胃质子泵耦合来阐明新的盐酸分泌机制

基本信息

批准号：
16657042
负责人：
酒井秀紀
金额：
$ 2.05万
依托单位：
University of Toyama (2005)Toyama Medical and Pharmaceutical University (2004)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

K-Cl共輸送体(KCC)の胃における機能はこれまで不明であった。本研究では、胃酸(HCl)の分泌機構におけるK-Cl共輸送体(KCC)の役割を解明することを目的とした実験を行い、以下のような新しい知見を得た。1.ウサギ、ラット、マウスの胃粘膜に発現するKCC3は、KCC3aアイソフォーム(180kDa)であることがわかった。脳のKCC3a(150kDa)のサイズとは異なったが、PNGase F処理によって180kDaおよび150kDaのバンドは共にコアタンパク質である130kDaに収束した。したがって胃酸分泌細胞のKCC3aは固有の糖鎖付加を受けているものと考えられた。2.ラット胃粘膜切片の免疫組織染色を行ったところ、胃酸分泌細胞においてKCC3aはNa^+,K^+-ATPaseの分布と一致し、H^+,K^+-ATPaseの分布とは異なったことから、KCC3aは基底側膜に局在することがわかった。3.テトラサイクリン処理によりKCC3aを安定発現させることができるT-Rexシステム導入細胞を構築した。興味深いことにKCC3aの発現により、Na^+,K^+-ATPaseの発現量が変化しないにもかかわらず、ATP加水分解活性は有意に上昇した。したがってKCC3aはNa^+,K^+-ATPaseと機能的に共役している可能性が考えられた。4.ラット、マウスの胃粘膜に新たにKCC4(160kDa)が発現していることを見出し、免疫組織染色によりKCC4は胃酸分泌細胞分泌膜においてH^+,K^+-ATPaseと共存することがわかった。KCC4は、胃酸分泌能の発達している胃腺上部の細胞に高発現していることから、KCC4の胃酸分泌機構への関与が示唆された。以上のことから、KCC3aおよびKCC4が関与する新しい胃酸分泌のスキームが考えられた。

迄今为止，K-Cl 协同转运蛋白 (KCC) 在胃中的功能尚不清楚。在本研究中，我们进行了实验来阐明K-Cl协同转运蛋白（KCC）在胃酸（HCl）分泌机制中的作用，并获得了以下新发现。 1. 在家兔、大鼠、小鼠胃粘膜中表达的KCC3被发现为KCC3a亚型（180kDa）。尽管大小与大脑 KCC3a (150kDa) 不同，但通过 PNGase F 处理，180kDa 和 150kDa 条带都汇聚到核心蛋白 130kDa 上。因此，胃酸分泌细胞中的KCC3a被认为是独特的糖基化。 2.大鼠胃粘膜切片免疫组化染色显示胃酸分泌细胞中KCC3a的分布与Na^+,K^+-ATPase的分布相匹配，但与H^+,K^+-ATPase的分布不同这些结果表明 KCC3a 定位于基底外侧膜。 3.我们构建了T-Rex系统导入细胞，通过四环素处理可以稳定表达KCC3a。有趣的是，KCC3a 的表达显着增加了 ATP 水解活性，尽管 Na^+,K^+-ATPase 的表达水平没有变化。因此，认为KCC3a可能与Na^+,K^+-ATP酶功能性偶联。 4.我们发现KCC4（160kDa）在大鼠和小鼠的胃粘膜中新表达，免疫组化染色显示KCC4与H^+,K^+-ATPase共存于胃酸分泌细胞的分泌膜中。。 KCC4在胃腺上部细胞中高表达，胃酸分泌能力在此发育，表明KCC4参与胃酸分泌机制。基于上述，设计了涉及KCC3a和KCC4的新胃酸分泌方案。

项目成果

期刊论文数量（12）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Effects of the anti-cancer drug gefitinib on Cl^- secretion in isolated rat colon.

抗癌药物吉非替尼对离体大鼠结肠 Cl^- 分泌的影响。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
J.Pharm.Soc.Jpn. 125巻
影响因子：
0
作者：
Ohkura J;Yamazaki H;Oyama Y;Morii M;Takeguchi N;Sakai H.
通讯作者：
Sakai H.

Novel molecular mechanisms of gastric phospholipids translocation activity in isolated hog gastric vesicles.

离体猪胃囊泡中胃磷脂易位活性的新分子机制。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Membrane 30
影响因子：
0
作者：
Morii M;et al.
通讯作者：
et al.

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Kobayashi S.;et. al.;酒井秀紀;Asano S. et al.;Fujii T. et al.;Sakai H. et al.;Tabuchi Y. et al.;Tabuchi Y. et al.;酒井秀紀;森井孫俊;酒井秀紀;藤井拓人;高橋佑司;高橋佑司;藤井拓人;山内理嗣
通讯作者：
山内理嗣