胃酸分泌細胞の細管小胞融合におけるトランスポートソーム機能の解明

胃酸分泌细胞管泡融合中转运体功能的阐明

基本信息

批准号：
18059012
负责人：
酒井秀紀
金额：
$ 5.12万
依托单位：
University of Toyama
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、胃酸分泌機構の最終段階におけるトランスポートソーム(胃酸分泌分子複合体)の構成と機能を明らかにすることを目的とした。まず、ブタ胃細管小胞に富むベシクル(TV)および分泌膜に富むベシクル(SA)をCHAPS.で処理後、不溶性画分(DRM)および可溶性画分(non-DRM)の単離を行った。総リン脂質は、TVでは大部分がDRMに局在していたが、SAではDRM、non-DRMに同程度に分布していた。TVではカベオラマーカーのcaveolin-1が高発現しており、SAでは脂質ラフトマーカーのflotillin-2が高発現していた。このことからTV自体がカベオソームであり、一方、SAにはラフトおよび非ラフト領域が存在するものと考えられた。胃プロトンポンプ(H^+, K^+-ATPase)は、カベオソーム、ラフト、非ラフトの3種類すべての場に存在していた。TVに高発現しているCl^-/H^+対向輸送体のCLC-5は、H^+, K^+-ATPaseと共にDRMに分布し、両者は免疫共沈降した。Methyl-β-cyclodextrin(MβCD)処理により、CLC-5とH^+, K^+-ATPaseはnon-DRMに移行し、水溶性コレステロール添加によりDRMへ再分布した。これとパラレルにH^+, K^+-ATPase活性は、MβCD処理により減少し、コレステロール添加により回復した。SAに高発現しているK^+-Cl^-共輸送体のKCC4は、H^+, K^+-ATPaseと免疫共沈降した。KCC4阻害剤のDIOAは、SAのH^+, K^+-ATPaseによるプロトン輸送活性を阻害したが、TVの輸送活性に影響を与えなかった。以上の結果から、胃酸分泌細胞の分泌膜と細管小胞では、胃酸分泌分子複合体とそれを取り巻く環境が大きく異なっており、それぞれ空腹時と摂食時の胃酸分泌機構に対応しているものと考えられた。

本研究的目的是阐明胃酸分泌机制最后阶段转运体（胃酸分泌分子复合物）的组成和功能。首先，用CHAPS处理富含猪胃小管囊泡(TV)的囊泡和富含分泌膜的囊泡(SA)，然后分离不溶性部分(DRM)和可溶性部分(非DRM)。 TV 中总磷脂主要集中在 DRM 中，但 SA 中 DRM 和非 DRM 中的总磷脂分布均匀。小窝标记物caveolin-1在TV中高表达，脂筏标记物flotillin-2在SA中高表达。这表明 TV 本身是一个洞穴，而 SA 包含筏区和非筏区。胃质子泵（H^+、K^+-ATP酶）存在于所有三种类型中：小体、筏式和非筏式。 CLC-5是一种在TV中高表达的Cl^-/H^+逆向转运蛋白，与H^+、K^+-ATP酶一起分布在DRM中，并且两者均进行免疫共沉淀。通过用甲基-β-环糊精(MβCD)处理将CLC-5和H^+、K^+-ATP酶转移至非DRM，并通过添加水溶性胆固醇重新分配至DRM。同时，MβCD 处理降低了 H^+、K^+-ATP 酶活性，并通过添加胆固醇而恢复。 KCC4 是一种在 SA 中高度表达的 K^+-Cl^- 协同转运蛋白，与 H^+、K^+-ATP 酶进行共免疫沉淀。 KCC4抑制剂DIOA抑制H^+、K^+-ATP酶对SA的质子转运活性，但不影响TV的转运活性。由上述结果可知，胃酸分泌细胞的分泌膜和小管囊泡中的胃酸分泌分子复合物和周围环境存在显着差异，它们分别对应于禁食和进食时的胃酸分泌机制。被认为是。

项目成果

期刊论文数量（28）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

胃H^+,K^+-ATPaseのプロトン輸送路への変異導入

将突变引入胃 H^+,K^+-ATP 酶的质子转运途径

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
Kobayashi S.;et. al.;酒井秀紀;Asano S. et al.;Fujii T. et al.;Sakai H. et al.;Tabuchi Y. et al.;Tabuchi Y. et al.;酒井秀紀;森井孫俊;酒井秀紀;藤井拓人;高橋佑司;高橋佑司;藤井拓人;山内理嗣
通讯作者：
山内理嗣

ヒト高分化型胃がん細胞におけるアクアポリン-5の極性維持機能

水通道蛋白5在人高分化胃癌细胞中的极性维持作用

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
Kobayashi S.;et. al.;酒井秀紀;Asano S. et al.;Fujii T. et al.;Sakai H. et al.;Tabuchi Y. et al.;Tabuchi Y. et al.;酒井秀紀
通讯作者：
酒井秀紀

Modulation of gastric proton pump activity by CLC-5

CLC-5 调节胃质子泵活性

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
Kobayashi S.;et. al.;酒井秀紀;Asano S. et al.;Fujii T. et al.;Sakai H. et al.;Tabuchi Y. et al.;Tabuchi Y. et al.;酒井秀紀;森井孫俊;酒井秀紀;藤井拓人;高橋佑司;高橋佑司
通讯作者：
高橋佑司

2つの異なる胃酸分泌最終段階における胃プロトンポンプ複合体

胃酸分泌的两个不同最终阶段的胃质子泵复合体

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
Kobayashi S.;et. al.;酒井秀紀;Asano S. et al.;Fujii T. et al.;Sakai H. et al.;Tabuchi Y. et al.;Tabuchi Y. et al.;酒井秀紀;森井孫俊;酒井秀紀;藤井拓人;高橋佑司;高橋佑司;藤井拓人;山内理嗣;酒井秀紀;藤井拓人;酒井秀紀
通讯作者：
酒井秀紀

ヒト胃ガン細胞におけるアクアポリン・5の生理機能

水通道蛋白5在人胃癌细胞中的生理功能

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
Kobayashi S.;et. al.;酒井秀紀;Asano S. et al.;Fujii T. et al.;Sakai H. et al.;Tabuchi Y. et al.;Tabuchi Y. et al.;酒井秀紀;森井孫俊;酒井秀紀;藤井拓人;高橋佑司;高橋佑司;藤井拓人;山内理嗣;酒井秀紀;藤井拓人;酒井秀紀;高橋佑司;酒井秀紀
通讯作者：
酒井秀紀