DNA結合蛋白質を利用したナノドット・分子素子の自由配列と量子細線の形成

使用 DNA 结合蛋白自由排列纳米点/分子元素并形成量子线

基本信息

批准号：
16651051
负责人：
山村剛士
金额：
$ 2.37万
依托单位：
Tokyo University of Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度の成果は以下のとおりである。1)光活性分子素子とジンクフィンガーの融合・DNAとの結合:まず、従来の配列を変えN端側にルテニウム(オスミウム)トリスバイピリジン錯体部を移した。Tbp^<Ru>-F1F2:Tbp^<Ru>-GTGEKPYG-CRICGRNFSRSDDLTRHIRTHTGEKPYGCRICGRNFSRSDHLTR-HIRTHTGEKPYYGこの配列換えによりケミカルライゲーション法の適用が可能になり、自由にフィンガー側の配列を選べるようになる。改めてTbp^<Ru(Os)>-ZFの合成法を検討し、まず、ライゲーションの原料になるTbp^<Ru(Os)>-GTGEKPYGチオエステルの大量合成法確立に努めた。その結果、TAMPAL resinから固相法により伸長し、直接チオエステルを切り出す方法が有効であることを見出した。この方法でTbp^<Ru>-GTGEKPYG-F1F2とTbp^<Os>-GTGEKPYG-F2F1(F1、F2は何れも単鎖のジンクフィンガー)の合成を試み、前者については単離・精製に成功し、更に、50bp DNA上に5個直列配列させることに成功した。後者についても、Tbp^<Os>-GTGEKPYG-F2の合成に成功している。2)ドットとの結合能を有する新規ジンクフィンガー融合蛋白質の合成:前年度における検討から、金のドットと1:1で反応し、安定にハンドリングすることが可能なペプチドとして、メタロチオネイン(MTIIのαドメイン)とジンクフィンガーの融合蛋白質の合成を企図した。F3F3-MT : TGEKPYGCRICGRNFSRSDNLTRHIRTHTGFKPYGCRICGRNFSRSDNLTRHIRTHTGEKP YG-MTII_α様々な検討の結果、固相合成後液相でのフラグメント縮合によりこの融合蛋白質の単離・生成に成功した。現在、金ドットの導入を検討中である。

今年的结果如下：1）光活性分子装置和锌手指的融合并与DNA结合：首先，将常规序列更改，并将Trisbipyridine络合物转移到N末端侧。 tbp^<ru> -f1f2：tbp^<ru> -gtgekpyg-cricgrnfsrsddltrhirttgekpykpykpygcricgrnfsrsrsrsrsrsrsrsrsrsrsrsrsrsrsrsrsrsrsrsrsrsdgekpyygthis this re-seseence允许使用化学连接方法，从而可以自由地分组，从而可以自由地分组。我们再次研究了TBP^<ru（OS）> -ZF的合成，并首先努力建立TBP^<ru（OS）> - gtgekpyg thioester的质量合成，这是连接的原材料。结果，发现一种直接通过固相方法切除硫代植物的方法是有效的。使用这种方法，尝试了tbp^<ru> -gtgekpyg-f1f2和tbp^<OS> -gtgekpyg-f2f1（F1和F2都是单链锌指）的合成，并且成功地隔离并纯化了前者，并且5个在50 bp dna上被连续纯化并纯化了。后者也已成功合成了TBP^<OS> -gtgekpyg-f2。 2）合成具有点结合能力的新型锌指融合蛋白：从上一年的研究中，我们计划合成金属硫蛋白（MTII的Alpha结构域）和锌指在肽之间合成融合蛋白，作为肽，以1：1反应金点，并可以稳定地处理。 F3F3-MT：TGEKPYGCRICGRNFSRSDNLTRHIRTHTGFKPYGCRICGRNFSRSDNLTRTRHIRTHTGEKP YG-MTII_α。通过各种研究的结果，融合蛋白成功地分离并通过固体相结合后的液体液相结合而产生融合蛋白。我们目前正在考虑引入黄金点。