肝癌患者に対する肝移植を想定した肝細胞増殖因子作用下のドナー細髄移植併用の効果

肝细胞生长因子作用下联合供体细骨髓移植对肝癌患者肝移植的影响

• 批准号: 15659316
• 负责人: 藤元 治朗
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Hyogo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659316/
• 关键词: 肝癌; 肝移植; 骨髄移植; GVHD; HGF

肝癌患者に対する新しいstrategyとして、肝移植を想定した肝細胞増殖因子(HGF)作用下のドナー骨髄移植併用効果の検討を行った。まず骨髄移植によるGVHD効果が肝癌に対して抑制効果があり、HGFがGVHDを制御できるかを検討するためにマウス骨髄移植モデルを確立して検討を行った。(方法)1、マウス肝癌細胞Hep1A (C57BL/6N由来肝癌細胞)をターゲット癌細胞に選択し、これを移植するレシピエントマウスとしてB6C3F1、骨髄移植のドナーとしてC3H/HeNを用いた。B6C3F1にHep1Aを移植した群をコントロール群、これに9Gyの全身放射線照射(TBI)を行ったものをTBI群、骨髄移植を施した群をBMT群、さらにHGFを導入したものをBMT+HGF群とした。腫瘍を移植した日をDAY0としHGFはDAY4,11,18,25に各100μg導入、DAY7に全身放射線照射(TBI)9gyと骨髄移植を行った。2、骨髄移植:C3H/HeNの大腿骨より骨髄、脾臓よりリンパ球を採取。全身に9Gyの照射を行ったB6C3F1の尾静脈より注入した。3、HGFの導入:導入にはHVJリポゾーム法を用いて行った。導入量は1回100μgとした。大腿内側に筋肉注射にて行った。4、摘出した皮下腫瘍を組織学的に解析行った。(結果)1、骨髄が移植されたかフローサイトメトリーで確認した。BMT後4週間、4ヶ月のマウスを対象とし骨髄および末梢血リンパ球(脾細胞)について検定したところ、すべての個体においてほぼ100%のキメラを形成し、長期間にわたり継続していた。2、腫瘍移植後4週目において平均腫瘍体積(mm3)はコントロール群1263.6、BMT+HGF群80.6と骨髄移植により腫瘍発育は有意に抑制された。3、BMT群ではHE染色にて小腸縦毛、大腸杯細胞の部分的消失、肝臓中心静脈周囲へのリンパ球の浸潤を認め、GVHDの所見を認めたが、BMT+HGF群では軽度の所見を認めるのみであり、HGFによるGVHDの抑制を認めた。4、酵素抗体および蛍光抗体を用いた免疫染色で、腫瘍内にdonor由来のリンパ球が証明された。現在さらにCTL assayを行い、donorリンパ球の関与を証明するとともに肝移植モデルでの検討を行っている。

作为肝癌患者的新策略，假设检查了肝脏移植的肝细胞术（HGF）作用下捐赠骨髓移植的作用。首先，由于骨髓移植引起的GVHD效应对肝癌具有抑制作用，并建立了小鼠骨髓移植模型，以考虑HGF是否可以控制GVHD。 （方法）1，小鼠肝癌细胞HEP1A（C57BL/6N衍生的肝癌细胞）用于目标癌细胞，并将C3H/HEN用作接受小鼠作为B6C3F1和骨髓移植供体移植的受体小鼠。 BMT组的HEP1A组对B6C3F1，具有9GY全体辐射辐射（TBI）的TBI组是骨髓移植，并将HGF引入BMT+HGF组。移植肿瘤的日期为Day0，HGF在第4,11,18,25天都引入了100μg，并在第7天引入了9GY（TBI）9GY（TBI）的骨髓移植。 2。骨髓移植：收集来自C3H/HEN股骨的骨髓和淋巴细胞。它是从B6C3F1尾静脉中注射的，该静脉在整个人体中辐射了9GY辐射。 3。引入HGF：使用HVJ脂质体法使用了引言。引入量一次为100μg。我用肌肉注射去了大腿。 4。有机分析提取的皮下肿瘤。 （结果）1。在流部位计数中确认骨髓是否被移植。 BMT四个月后，检查了4个月的小鼠，检查了骨髓和外周血淋巴细胞（脾细胞），在所有个体中形成了几乎100％的嵌合体并持续了很长时间。 2。在肿瘤转移后的第四周，平均肿瘤体积（MM3）为1263.6个对照组，80.6 BMT+HGF组，骨髓移植受到了显着抑制。 3。在BMT组中，他染色了结直肠杯细胞的部分丧失，肝脏中央静脉周围的淋巴细胞浸润，并识别出GVHD的发现，但在BMT+HGF组中，光线仅确认接受了HGF对GVHD的抑制。 4。使用酶抗体和荧光抗体的免疫染色，在肿瘤中证明了源自供体的淋巴球。目前，进一步进行了CTL测定，证明了供体淋巴细胞的参与，并使用肝移植模型对其进行了检查。