HIVの感染前期過程をモニターする系の確立とその阻害宿主因子の探索

建立HIV感染早期监测系统并寻找抑制其宿主因素

基本信息

批准号：
13877047
负责人：
前田洋助
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13877047/
关键词：
HIV ウイルス複製感染前期過程感染抵抗性阻害因子前期過程

项目摘要

昨年度確立したルシフェレース遺伝子をリポーターとして有するSelf-inactivating (SIN)-HIVを使用して、種々のヒト細胞株の感染前期過程におけるHIV感受性を調べた。その結果,ヒトT細胞株間でも感染前期過程において感受性に10倍以上の差があることが判明した。特に、HUT78細胞株においてそのHIV抵抗性は顕著であった。さらに本年度は末梢リンパ球においてもHIV感染に対する阻害が存在していることを確認し、このような感染抵抗性が広くヒト細胞に存在していることが示唆された。また、種々の感染前期過程をモニターすることが可能なPCRを使用してより詳細に検討したところ、主に逆転写レベルでその阻害がかかっていると結論された。さらに、個々の細胞レベルでのHIV感受性の差異を調べる目的で、本年度はリポーター遺伝子としてGFPを有するSIN-HIVを作製した。その結果、ルシフェレース遺伝子を有するHIVとほぼ同様にHIVに対しHUT78細胞が比較的耐性であることが判明した。また旧世界サル、特にアフリカミドリザル由来細胞株であるCV-1、B95a、Vero細胞株はHIV感染抵抗性細胞株であり、これらのヒト以外霊長類における感染抵抗性についても現在解析を進めているところである。このような結果をふまえて現在、細胞由来感染阻害因子の探索を行っている。HIV感受性細胞であるHOS細胞にヒトリンパ球由来cDNAライブラリーレトロウイルスを導入し、ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ(HSV-TK)をリポーターとして有するHIVを感染させ、ガンシクロビル存在下で培養し、HIV感染抵抗性細胞を樹立中であり、これらの細胞に導入されたcDNAを今後クローニングしていく予定である。

去年作为记者建立的荧光素酶基因的自我激活（SIN）-HIV用于研究在各种人类细胞系的感染过程中HIV的敏感性。结果表明，即使在感染前的人类T细胞系中，易感性也有10倍。特别是，其HIV耐药性在HUT78细胞系中很突出。此外，今年我们证实，外周淋巴细胞中也存在抑制HIV感染的抑制作用，这表明这种感染抗性在人类细胞中广泛存在。此外，使用PCR进行进一步检查（允许监测各种感染过程）得出的结论是，它主要在反转录水平上被抑制。此外，为了研究单个细胞水平上HIV敏感性的差异，今年以GFP为记者基因的SIN-HIV是由GFP进行的。结果，发现HUT78细胞对HIV具有相对抗性，几乎就像携带荧光素酶基因的HIV一样。此外，源自旧世界猴子，尤其是非洲绿猴的细胞系是耐HIV感染的细胞系，我们目前正在对非人类灵长类动物的感染耐药性进行分析。基于这些结果，我们目前正在寻找细胞来源的感染抑制剂。 HOS cells, which are HIV-sensitive cells, are introduced with human lymphocyte-derived cDNA library retrovirus, infected with HIV carrying herpesvirus thymidine kinase (HSV-TK) as a reporter, cultured in the presence of ganciclovir, and HIV infection resistant cells are being established, and cDNA introduced into these cells will be cloned in the future.