単球/マクロファージにおけるオキシステロール生成の機序に関する研究

单核/巨噬细胞产生氧甾醇的机制研究

基本信息

批准号：
12770646
负责人：
加藤博史
金额：
$ 1.22万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでのマウス由来マクロファージクローンを用いた検討では、細胞膜表面に持続的にoxysterolを発現するクローンと全く発現しないクローンとが見出されたが、それらのクローンにおけるoxysterol発現量を調節する因子は未だ見つかっていない。そこで今年度は、これらのクローンについて、細胞表面抗原の発現、サイトカイン産生能をインターフェロン-γ(IFN-γ)あるいはリポポリサッカライド(LPS)による刺激の前後について詳細に検討し、oxysterolの発現と相関する因子を探索した。細胞表面抗原はクラスII抗原(H-2^d)、Mac-1、CD40、B7-1/-2等についてFITC標識抗体を用いたFACS解析を行った。サイトカインはIFN-γ、LPS刺激前後のマクロファージ培養上清中IL-1、IL-6、IL-12、TNF、GM-CSF,をELISA法を用いて測定した。クラスII抗原の発現量はクローン間で大きく異なり、IFN-γによって発現が誘導されるものとそうでないものが見いだされた。しかし、クラスII抗原の発現量とoxysterol発現量の間に相関はみられなかった。Mac-1、CD40、B7-1/-2はすべてのクローンで検出され、クローン間に発現量の差はみられたがoxysterol発現量との間で相関するものはなかった。サイトカインはすべてについて無刺激のマクロファージクローンの培養上清には検出されず、1L-1、IL-6、TNF、GM-CSFはLPS刺激によってすべてのクローンで産生が確認されたが特にGM-CSFにおいて産生量がクローン間で大きく異なった、IFN-γによる前処理はLPS刺激後のサイトカイン産生を増加させた。IL-12はLPS単独の刺激で産生するもの、IFN-γとLPSで刺激することで初めて産生するもの、IFN-γとLPSでの刺激後も産生しないもの、の3種類に分かれた。しかしこれらのサイトカイン産生のパターンとoxysterol発現量の間に相関はみられなかった。以上の結果から、マクロファージにおけるoxysterolの発現は細胞表面抗原の発現あるいはサィトカイン産生の調節とは独立した機構で調節されていることが示唆された。

先前使用小鼠来源的巨噬细胞克隆的研究发现，一些克隆在细胞膜表面持续表达氧甾醇，而另一些则根本不表达，但调节这些克隆中氧甾醇表达量的因素尚未确定。成立。因此，今年，我们将详细检查这些克隆在干扰素-γ（IFN-γ）或脂多糖（LPS）刺激前后的细胞表面抗原表达和细胞因子产生能力，并研究与氧甾醇表达的相关性。寻找导致的因素使用 FITC 标记的抗体通过 FACS 分析细胞表面抗原，例如 II 类抗原 (H-2^d)、Mac-1、CD40 和 B7-1/-2。采用ELISA法测定LPS刺激前后巨噬细胞培养上清液中的IFN-γ、IL-1、IL-6、IL-12、TNF、GM-CSF等细胞因子。 II类抗原的表达水平在克隆之间差异很大，并且发现在一些克隆中表达是由IFN-γ诱导的，而在另一些克隆中则不是。然而，在II类抗原的表达水平和氧甾醇表达水平之间没有观察到相关性。所有克隆中均检测到Mac-1、CD40和B7-1/-2，虽然各克隆之间表达水平存在差异，但与氧甾醇表达水平没有相关性。在未刺激的巨噬细胞克隆的培养上清液中未检测到所有细胞因子，并且在LPS刺激后，特别是用IFN-预处理的GM-CSF，在所有克隆中均证实产生1L-1、IL-6、TNF和GM-CSF。 LPS刺激后γ增加了细胞因子的产生，其数量在克隆之间存在显着差异。 IL-12分为三种类型：一种是仅用LPS刺激时产生的，一种是仅用IFN-γ和LPS刺激时产生的，一种是即使用IFN-γ和LPS刺激后也不产生的。然而，没有观察到这些细胞因子产生模式和氧甾醇表达水平之间的相关性。这些结果表明巨噬细胞中氧甾醇的表达受到独立于细胞表面抗原表达或细胞因子产生的机制的调节。