アゴウチ蛋白に特異的な細胞内シグナル伝達経路の解明

阐明刺豚鼠蛋白特异的细胞内信号转导途径

基本信息

批准号：
12770447
负责人：
古村南夫
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

アゴウチシグナル蛋白(ASP)により、マウス皮膚および培養メラノサイトで発現が亢進することが確認されたbHLH転写因子ITF2のメラニン生成制御への関与について、本年度は更に詳細に検討した。昨年度は培養メラノサイトにITF2のcDNAを遺伝子導入して一過性に過剰発現させ、チロシナーゼをはじめとしたメラニン生成酵素の遺伝子の発現がITF2により低下すること、また反対にITF2の発現をアンチセンスcDNAで抑制するとメラニン生成酵素の発現が亢進することを確認したが、薬剤耐性マーカーによる発現細胞選別によりstableにITF2遺伝子導入を行った培養メラノサイトで、メラニン生成関連酵素の発現が蛋白レベルでITF2により制御でき、ITF2によりメラノサイトの形態が樹枝状突起の減少、増殖速度の増加、色調がメラニン生成の減少により淡色化することが明らかになった。すでに、ITF2がメラノサイト特異的転写因子であるmicrophthalmiaの発現を抑制することによってメラニン生成遺伝子の発現低下が引き起こされることを我々は確認しているが、普遍的に発現されているITF2がメラニン生成に関わる特異的遺伝子の制御だけでなく、メラノサイトの分化も制御しうる転写因子であることが改めて確認された。Microphthalmiaのプロモーター領域でのITF2の抑制部位の検討では、CREB、PAX3、LEF1等のmicrophthalmia発現を活性化させるとされる転写因子の結合部位より更に上流の不完全E-BOXが関与している可能性を示唆する結果を得たが、ITF2cDNAへのE-BOX結合部位の変異導入などにより、ITF2が直接作用してこのような結果が得られるのかどうかを確認する必要があると思われる。また、この不完全E-BOXを変異させることで、microphthalmiaが発現変化するか否かの解析を現在進めている。

今年，我们更详细地研究了BHLH转录因子ITF2的参与，该因子已被证实可以增强小鼠皮肤和培养的黑素细胞的表达，以调节黑色素的产生。去年，将ITF2 cDNA转染到培养的黑素细胞中以瞬时过表达，而ITF2降低了黑素细胞的表达，另一方面，用反义cDNA抑制了ITF2表达，增加了黑素细胞的表达。然而，据透露，在培养的黑色素细胞中，通过使用耐药性标记来选择表达来介绍给稳定的ITF2基因，与黑色素形成细胞相关的黑色素细胞的表达可以由ITF2在蛋白质水平上控制，而ITF2可以在蛋白质水平上控制，而ITF2可以使iTF2的表达降低了树突的生长速度，并降低了树突的生长速度，并降低了树突的生长速度。我们已经证实，ITF2抑制了一种黑色素细胞特异性转录因子的微观智能的表达，从而导致产生黑色素细胞的基因表达的降低，但再次证实，它再次证实，它是普遍表达的ITF2，它是一种可以控制涉及特定基因的转录因子，而不是涉及特定基因的转录因子。在检查微噬菌体启动子区域中ITF2的压抑位点时，我们发现结果表明，不完整的电子框是从转录因子的结合位点上游的，据说可以激活Microphmia表达，例如CREB，PAX3和LEF1涉及繁殖，但它是否涉及IT FIND IT FIND IT FIND IT FIND IT FIND IT FIND IT-IT ACT ACT ACT ACT ACT ACT ACT ACT ACT ACT ACT进行确认。 ITF2 cDNA。此外，我们目前正在进行一项分析，以确定通过突变该不完整的电子框而改变微心心含量。