メラノソームの色素細胞内輸送における低分子量GTP結合蛋白質の機能解析

低分子量 GTP 结合蛋白在黑素体细胞内色素转运中的功能分析

• 批准号: 12770442
• 负责人: 荒木 敬司
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770442/
• 关键词: 低分子量GTP結合蛋白質; メラノソーム; Rab3A

培養した色素細胞に対し、メラノソームを特異的に認識するMel-5抗体と抗Rab8抗体による二重染色を行い、Rab8とメラノソームの局在をコンフォーカル免疫蛍光法で解析したところ、両者の局在部位は一致しなかったものの、色素細胞の樹枝状突起先端部にRab8の存在が確認出来た。次に、Rab8が樹枝状突起の形成と何らかの関連を持つか否かを検討するために、Rab8のアンチセンスオリゴマーを作製して(Huber et al.,1995)、正常色素細胞の培養液中に添加しRab蛋白の発現を抑制した後、一般に色素細胞の樹枝状突起形成を促進することが知られているα-MSHを添加し、色素細胞の樹枝状突起形成の様子を観察した所、コントロールにはセンスオリゴマーを用いた場合に比べ、アンチセンスを用いた場合の方が、樹枝状突起形成に抑制効果が見られた。

用特异性识别黑素体的 Mel-5 抗体和抗 Rab8 抗体对培养的色素细胞进行双染色，并使用共聚焦免疫荧光分析 Rab8 和黑素体的定位，尽管位点不匹配，但证实了 Rab8 的存在。位于色素细胞树突的尖端。接下来，为了检查 Rab8 是否与树突形成有任何关系，我们创建了 Rab8 的反义寡聚物（Huber 等，2017）。 al., 1995)将其添加到正常色素细胞的培养基中以抑制Rab蛋白的表达，然后将众所周知的促进色素细胞树突形成的α-MSH添加到正常色素细胞的培养基中当观察细胞内树突形成的状态时，发现使用反义寡聚物比使用有义寡聚物作为对照对树突形成有更大的抑制作用。

项目成果

Keishi Araki: "Small GTPase Rab3A is Associated with Melanosomes in Melanoma Cells"Pigment Cell Research. 13. 332-336 (2000)

Keishi Araki：“小 GTP 酶 Rab3A 与黑色素瘤细胞中的黑色素体相关”色素细胞研究。