メラノソームの色素細胞内輸送における低分子量GTP結合蛋白質の機能解析

低分子量 GTP 结合蛋白在黑素体细胞内色素转运中的功能分析

• 批准号: 10770407
• 负责人: 荒木 敬司
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770407/
• 关键词: メラノソーム; 細胞内輸送; 低分子量GTP結合蛋白質; Rab3A; RabGDI; Rabphilin-3A

まづ、マウスおよびヒト培養色素細胞の抽出物から、超遠心分離器を用いた数段階の遠心とショ糖密度勾配法を用いてサブセルラーフラクショネーションを行い、メラノソーム画分を分離・精製した(Seiji et al,1963)。このメラソノーム画分を含む全角分に対して、抗Rab2、Rab3A、Rab5、Rab7、Rab8、Rab10抗体によるイムノブロットを施行し各蛋白質の細胞内局在を検討したところ、特にRab3Aがメラノソーム画分にのみ限局して存在することが明らかとなった。また、神経細胞のシナプス小胞から精製され(Shirataki et al,1992)、Rab3Aの標的蛋白質と考えられているRabphilin-3Aや、Rab3Aの細胞質内チャペロンと考えられているRabGDIに関しても同様にイムノブロット法にてメラノソーム画分にのみ限局して存在することが明らかとなった。そこでさらに電子顕微鏡を用いた金コロイド免疫法でRab3Aの細胞内分布を検討したところメラノソームの膜上に金コロイドの集積を認めた。培養した色素細胞に対し、メラノソームを特異的に認識するMel-5抗体と抗Rab3A抗体による二重染色を行い、Rab3Aならびにメラノソームの局在をコンフォーカル免疫蛍光法で解析したところ両者の局在に一致がみられた。元来、Rab3Aは神経シナプスにおいて、シナプス小胞がシナプス膜に輸送され融合した後に神経伝達物質を放出する過程に関与していると考えられているため、私共の結果からRab3Aがメラノソームの細胞内輸送機構にも神経系と同様に関与している可能性があると考えられるため、今後もさらなる研究を展開したいと考えている。

从小鼠和人类培养物有色细胞的提取物中，使用几个步骤的离心步骤进行了亚ula子分馏，并使用超固定的分离剂进行了蔗糖密度梯度，并分离了黑色素体绘画（Seiji等，1963年）。 ）。对于此Melasonomome的完整宽度，抗-rab2，rab3a，rab5，rab7，rab8，rab8和rab10抗体被实施，以检查每种蛋白质的子宫内膜，尤其是在Rab3a中。同样，对于rabphilin-3a而言，从神经细胞突触天鹅绒中纯化（Shirataki等，1992），被认为是Rab3a的靶蛋白，而Rabgdi被认为是Rab3a，Rab3a，Rabogical Cell的伴侣的Rabgdi Imnoblot。另外，使用电子显微镜通过金型果皮免疫法检查了Rab3a的细胞内分布，并在黑色素膜的膜上观察到金胶体的积累。 MEL-5抗体和抗RAB3A抗体专门识别黑色素体与培养的色素细胞进行，并通过匹配的冲突免疫荧光法分析了Rab3a和黑色素体的定位。最初，RAB3A被认为参与神经突触中神经递质在神经突触中释放的过程，在释放神经递质的过程中，我们也可能参与内部运输机制。作为神经系统，我们将继续进行进一步的研究。