NoD/SCIDマウスを用いたヒト造血幹細胞の体外増幅法の研究

NoD/SCID小鼠体外扩增人类造血干细胞的研究

基本信息

批准号：
12770409
负责人：
植田高弘
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Nippon Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

平成12年度に私は、ヒト造血細胞を免疫不全(NOD/SCID)マウス骨髄に再構築するin vivoアッセイ系を確立し、骨髄再構築能を持つヒト造血幹細胞の測定を可能とした。さらにこのアッセイ系を用いて、ヒト造血幹細胞(SRC:scid repopulating cell)の体外増幅法を検討したところ、SCF+FL+TPO+IL-6/sIL-6Rのサイトカインの組み合わせで、ヒト造血細胞の平均生着率は培養前の細胞を移植したものに比べて約10倍も高く、SRCも4.2倍と著明に増幅されていることが証明された。この実験系を用いて、私が作成した、Green fluorecence protein(GFP)を選択マーカーに組み込んだレトロウイルスベクターを用いて、増幅した造血幹細胞に対し遺伝子導入し、NOD/SCIDマウス内での長期造血再構築能を有する造血幹細胞に対する遺伝子導入効率を検討を試みた。まず遺伝子導入する造血幹細胞のソースとして、骨髄と臍帯血のCD34陽性細胞について、その中に含まれる造血幹細胞の性状を比較検討した。骨髄再構築能は臍帯血のCD34陽性細胞の方が遥かに優れていることが確認され、遺伝子導入実験のソースとしては臍帯血のCD34陽性細胞を用いて行うこととした。現在上記のサイトカインの組み合わせで臍帯血CD34陽性細胞に遺伝子導入をしているが非常に高率にCD34陽性細胞にGFP遺伝子導入が可能であり、そこから形成されるコロニー細胞にも高率にGFP遺伝子が導入されていることが確認できた。現在NOD/SCIDマウスに移植して生着細胞中のGFPの割合を各臓器で検討中である。

在2000年，我建立了一个体内测定系统，该系统将人造血细胞重建为免疫缺陷（NOD/SCID）小鼠骨髓，从而可以测量人类造血干细胞，具有重建骨髓的能力。此外，使用该测定系统，我们研究了人类造血干细胞（SRC）的一种体外扩增方法，并证明人造血细胞的平均植入率是培养前移植细胞的平均植入率约10倍，并且SRC在4.2次时也显着放大。使用该实验系统，我使用了将绿色荧光蛋白（GFP）掺入可选标记物的逆转录病毒载体，并将基因转移用于扩增的造血干细胞，并试图研究具有长期造血性造血细胞的基因转移效率，这些干细胞具有长期的造血性造血性造血细胞中的造血性干细胞。首先，我们比较了骨髓和脐带血中包含的造血干细胞的特性，作为要转染的造血干细胞的来源。已经证实，重建骨髓的能力远远超过脐带血中的CD34阳性细胞，并且基因转移实验的来源是在脐带血液中使用CD34阳性细胞。当前，上述细胞因子的组合已用于将基因转移到脐带血CD34阳性细胞中，但已证实可以将GFP基因以非常高的速率转移到CD34阳性细胞中，并且GFP基因也已转移到形成的菌落细胞中。当前，将每个器官都在移植到NOD/SCID小鼠中后，正在检查植入细胞中GFP的比例。