全身性自己免疫疾患に対するサイトカイン(IL-12)遺伝子治療の研究

细胞因子（IL-12）基因治疗系统性自身免疫性疾病的研究

基本信息

批准号：
12770234
负责人：
萩原恵里
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770234/
关键词：
DNAプラスミド IL-12 全身性自己免疫疾患自己免疫発症マウス

项目摘要

目的:IL-12遺伝子治療の臨床応用を最終目標とし、マウスIL-12発現プラスミドの投与量の違いにより自己免疫モデルマウスの病態がどう修飾されるかを検討した。結果:MRL/MP-lpr/lprマウスに対してマウスIL-12発現プラスミド(pIL-12)を投与し、全身リンパ節腫脹・脾腫・腎炎などの自己免疫疾患の病態を観察した。前年の報告で、20μg/動物を3週間毎筋注することによりリンパ節へのCD4^-CD8^-T細胞の異常増殖が抑制され、全身リンパ節腫脹の軽減・脾腫の軽減・尿蛋白の減少・腎炎の組織学的所見の改善などが認められたことを報告した。今年度はさらに、MRLマウスの加齢に伴い血清IL-12(p40)が上昇することをELISAにて確認した。P40はIL-12の生理的アンタゴニストであり、この結果はIL-12投与が病態に有用である可能性をさらに示唆している。しかし、異なる量のpIL-12を同マウスに投与し血清中のIL-12をELISAにて測定した実験では、明らかな用量依存性の血清IL-12の上昇は認められなかった。また、高用量(100μg)の投与では逆にリンパ節腫腸は増悪し、CD4^-CD8^-T細胞の異常増殖は促進されることが今回確認された。これはIL-12によりCD4^-CD8^-T細胞のアポトーシスが抑制されるためと考えられた。そこでさらに、プラスミド由来のIL-12mRNAのみを検出するRT-PCRの系を確立し、異なる量のpIL-12を投与した後の生体内でのmRNA発現を定量することを試みたが、この実験系による解析では十分な結果は得られなかった。

目的：以IL-12基因治疗的临床应用为最终目标，我们研究了不同剂量的小鼠IL-12表达质粒如何改变自身免疫模型小鼠的病理学。结果：将小鼠IL-12表达质粒（pIL-12）给予MRL/MP-lpr/lpr小鼠，观察全身淋巴结肿大、脾肿大、肾炎等自身免疫性疾病的病理变化。去年的一份报告中，每3周肌内注射20μg/动物可抑制CD4^-CD8^-T细胞向淋巴结的异常增殖，减少全身淋巴结肿大，减少脾肿大，并减少尿蛋白。报道称，肾炎的组织学表现减少，肾炎的组织学表现改善。今年，我们还使用 ELISA 证实，MRL 小鼠的血清 IL-12 (p40) 随着年龄的增长而增加。 P40 是 IL-12 的生理拮抗剂，该结果进一步表明 IL-12 给药可能对病理状况有用。然而，在对同一小鼠施用不同剂量的pIL-12并通过ELISA测量血清IL-12的实验中，没有观察到血清IL-12明显的剂量依赖性增加。此外，已证实给予高剂量（100μg）会加重肠道淋巴结病并促进CD4^-CD8^-T细胞的异常增殖。这被认为是由于IL-12抑制了CD4^-CD8^-T细胞的凋亡。因此，我们进一步建立了仅检测质粒衍生的 IL-12 mRNA 的 RT-PCR 系统，并尝试在施用不同量的 pIL-12 后定量体内 mRNA 表达，但基于系统的分析未产生足够的结果。