破骨細胞分化制御因子の統合的解析-RANK/NFkBとc-fosとの相互作用-

破骨细胞分化调节因子的综合分析 - RANK/NFkB与c-fos之间的相互作用 -

基本信息

批准号：
12770060
负责人：
井上大輔
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770060/
关键词：
破骨細胞 AP-1 NF-kB 転写因子細胞分化

项目摘要

1.ヒト前骨髄球性白血病細胞株であるHL-60を活性型ビタミンDおよびTPAで刺激することにより破骨細胞/マクロファージ系への分化を誘導すると、RANK mRNAの発現が著明に誘導された。2.上記のRANK発現誘導は機能的なRANKタンパクの細胞膜への発現を伴うことがMBP-RANKLを用いたin vitro結合アッセイにより確認された。3.この分化誘導刺激の際、gel shift assayでみたAP-1結合能の活性化がRANKの発現にやや先立って起こった。4.上記のAP-1の活性化はc-fosの発現そのものの上昇をも伴っていた。5.上記の如くRANKの発現を誘導したHL-60細胞をRANKLで刺激すると、AP-1およびNF-kB活性が上昇することがgel shift assayにより確認された。6.分化誘導によりRANKを発現したHL60-細胞をRANKLで刺激するとRANK自身の発現がmRNAおよびタンパクレベルで増加した。7.c-fos遺伝子ノックアウトマウスの脾細胞をM-CSF存在下で培養すると、RANK陽性の破骨細胞前駆細胞が得られた。これをRANKLで刺激すると程度は弱いものの、AP-1、NF-kBの活性化が認められた。以上の検討により、c-fosはRANKの発現そのものやRANKによるAP-1,NF-kBの活性化には必須でないことが明らかとなった。また、RANKLがRANK自身の発現を誘導するpositive feedbackにより破骨細胞分化が進行していく可能性が示された。RANKLの直接の標的遺伝子は他には知られておらず、RANKプロモーターはRANKLシグナルおよびこれにおけるc-fosの特異性を解析する有力なtoolとなり得るものと考えられた。

1。通过刺激具有活性维生素D和TPA的人类前虫细胞性白血病细胞系HL-60诱导分化为破骨细胞/巨噬细胞系统。 2。上述秩表达的诱导是通过使用MBP量-Ankl的体外结合测定来证实的，该测定涉及细胞膜上功能等级蛋白的表达。 3。在这种分化的刺激过程中，通过凝胶转移测定法所示的AP-1结合能力的激活发生在秩表达之前。 4。上面的AP-1激活伴随着C-FOS本身的表达增加。 5。刺激HL-60细胞，如上所述，通过凝胶移位测定，RANKL增加了AP-1和NF-KB活性，证实了等级表达。 6。通过诱导通过分化来刺激表达等级的HL60细胞，增加了在mRNA和蛋白质水平下等级本身的表达。 7。在M-CSF的存在下培养了来自C-FOS基因基因敲除小鼠的脾细胞，以获得秩阳性破骨细胞细胞。用RANKL刺激这一点显示AP-1和NF-KB的激活，尽管程度较小。上述研究表明，C-FOS对于等级表达本身或按等级的AP-1和NF-KB激活不是必不可少的。还已经表明，由于积极的反馈，破骨细胞的分化可能会进展，从而引起了排名。 RANKL的其他直接靶基因都不知道，并且等级启动子被认为是分析RANKL信号和C-FOS特异性的潜在工具。