エストロジェンによるロードシス発現に伴う視床下部ニューロン興奮特性の変化

与雌激素诱导的脊柱前凸相关的下丘脑神经元兴奋特性的变化

基本信息

批准号：
12770034
负责人：
濱田知宏
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Nippon Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

発情期のげっ歯類の雌に見られるエストラジオール(E_2)依存性のロードシス発現には、中脳灰白質(PAG)に投射している視床下部腹内側核(VMH)のE_2感受性ニューロンが重要な役割を演じている。このニューロンに関する細胞レベルでの生理学的特性を明らかにするために、前年度の結果(投稿準備中)より、後部PAGの腹側に逆行性トレーサーを注入することで、生きた状態で蛍光ラベルされたVMHニューロンについてslice patch clamp法を用いた電気生理学的な検討を行った。まず視床下部で重要なトランスミッターであるGABAに対する反応性について検討を試みたが、細胞が非常に脆弱で、あまりデータが得られなかった。この原因は同条件で視索前野ニューロンについて記録可能であるためVMHニューロンの性質に起因すると考えられるが、一方で蛍光トレーサーの副作用である可能性も考えられる。現在、視床下部スライス作製時の条件の再検討を行っている。また実験計画には記載されていなかったが、E2感受性ニューロン、さらに言えばエストロジェン受容体を含有するニューロンを生きた状態で可視化する目的で、α型ER遺伝子のプロモーターに蛍光タンパクであるGFPを結合させたトランスジェニックラットを作製した。GFPの蛍光は脳内で確認され、視床下部のみならず、大脳皮質や海馬にもGFPでラベルされたニューロンが存在しており、免疫組織化学的にα型ERとの共存も確認された。今後はこのトランスジェニックラットのPAGに逆行性トレーサーを注入し、GFPと二重ラベルされた細胞について膜特性、特にエストロジェンの作用に着目して電気生理学的な研究を進めて行くつもりである。

下丘脑腹内侧核 (VMH) 中投射到脑周灰质 (PAG) 的 E_2 敏感神经元对于雌性啮齿类动物发情期间观察到的雌二醇 (E_2) 依赖性脊柱前凸的表达很重要。为了在细胞水平上阐明该神经元的生理特征，根据前一年的结果（准备提交），我们在后PAG的腹侧注射了逆行示踪剂，使其被荧光标记使用切片膜片钳方法对VMH神经元进行电生理学研究。首先，我们试图检查下丘脑对重要递质 GABA 的反应性，但细胞极其脆弱，我们无法获得太多数据。其原因被认为是由于 VMH 神经元的特性，因为可以在相同条件下记录视前区神经元，但这也可能是荧光示踪剂的副作用。我们目前正在重新检查创建下丘脑切片的条件。尽管实验计划中没有提及，但荧光蛋白 GFP 与 α-ER 基因的启动子缀合，以便在活体状态下可视化 E2 敏感神经元，更具体地说是含有雌激素受体的神经元。老鼠。在大脑中确认了GFP荧光，并且GFP标记的神经元不仅存在于下丘脑中，而且存在于大脑皮层和海马中，并且通过免疫组织化学证实了与α型ER的共存。未来，我们计划将逆行示踪剂注射到这些转基因大鼠的PAG中，并对GFP双标记的细胞进行电生理学研究，重点关注膜特性，特别是雌激素的影响。