株化細胞の分化過程に対する内分泌攪乱物質の影響評価法の開発

开发一种评估内分泌干扰物对已建立细胞系分化过程的影响的方法

基本信息

批准号：
11780395
负责人：
吉見立也
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Tokyo University of Pharmacy and Life Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

1.M3E3/C3細胞の変化の検出【all-transレチノール添加】細胞を、レチノールを加えた条件において分化誘導培養を行い、肺の分化マーカーであるサーファクタント蛋白Sp-BとSp-C、及びCCSP(クララ細胞特異的分泌タンパク質)、HNF3α(肝細胞核因子)についてmRNAの発現変化を定量PCRによって検出する系を確立した。細胞は肺のクララ細胞様の分化形質を示すことがわかった。【hypoxia条件】 hypoxia条件において分化誘導培養を行い、神経内分泌細胞の分化マーカーであるクロモグラニンAについて発現変化をPCRによって検出する系を確立した。この結果、細胞は肺のNeuroendocrine細胞様の分化形質を示すことが示唆された。2.ホルモン様物質の暴露による影響上記の細胞分化系にエストラジオールを添加すると、Sp-B、及びCCSPの発現が減少したが、Sp-Cについては増加した。また、クロモグラニンAの発現はエストラジオールにより減少することがわかった。3.調節因子の解析ホルモン様物質が分化の更に上流に与える影響を探るために、肺における転写調節を行っている因子(HNF3α、TTF-1)について、PCRにより検出したところ、細胞分化に伴い発現は増加した。4.エストロゲンレセプターの発現解析ER-αについてはM3E3/C3細胞サンプルにおいて発現が検出されたが、エストラジオール添加による影響はみられなかった。β型レセプターの検出を試みたが発現量が少なく検出が困難であった。5.エストロゲンの影響の解析エストラジオールの影響は、この細胞の分化因子の発現に対して抑制的であることが示唆された。その影響を分子レベルで解析する為に、ホメオボックス領域に特異的なprimerを設計し、3'-RACE法を用いて検出を試みたところ、HoxA5について、発現が抑制される傾向が示された。

1。M3E3/C3细胞的变化[全反元视网膜添加]这些细胞在视黄醇方面进行了区分，并且它们是区分的，并且表面活性剂蛋白SP-B，SP-C和CCSP是分化标记，它们是分化标记物已经建立了肺（Clara细胞特异性分泌蛋白）和HNF3α（肝细胞核因子），以通过定量PCR检测mRNA表达的变化。事实证明，细胞表明肺中克拉拉细胞的分化。 [缺氧条件]在缺氧条件下进行了分化的诱导培养，并通过PCR建立了一种检测到神经内分泌细胞的分化标记的表达变化的系统。结果，建议细胞表明肺中神经内分泌细胞的分化特征。 2。当将雌二醇添加到上面的细胞分化系统中时，激素物质暴露的影响，SP-B和CCSP的表达减少，但SP-C增加了。还发现，雌二醇降低了染料仪的表达。 3。调整因子分析因子的分析，以探索激素物质在分化进一步分化的影响的影响，即通过PCR检测到肺（HNF3α，TTFF-1）在肺中进行转移的因子（HNF3α，TTF-1）的影响。随着细胞的分化。 4。在M3E3/C3细胞样品中检测到雌激素受体表达ER-α的表达，但由于添加了雌二醇而没有发现影响。我试图检测β型受体，但是由于表达量较低，因此很难检测到。 5。对雌激素作用的分析表明，雌二醇的影响抑制了该细胞分化因子的表达。为了分析分子水平的冲击，在Homo Box区域设计了一个特定的底漆，并尝试使用3'-Race方法检测，这表明HOXA5倾向于抑制。