骨型アルカリ性ホスファターゼ遺伝子発現を制御する転写因子群クローニング

控制骨型碱性磷酸酶基因表达的转录因子的克隆

基本信息

批准号：
11771133
负责人：
出山義昭
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

血清総アルカリ性ホスファターゼ(ALP)活性は以前より骨形成のマーカーとして臨床診断に用いられてきた。また、骨型ALPは骨芽細胞成熟のマーカーとされ、この活性の上昇が石灰化にとって非常に重要な意味を持つことが知られている。しかし、その機能は充分に判明しておらず、今後の研究の進展が待たれる。一方、転写因子の動向を知ることは、その転写因子が制御する遺伝子の発現を調節するシグナルを知る一つの指標となり、遺伝子の機能を知る上での手がかりとなりうる。本研究目的は、骨型ALP遺伝子を制御する新規の転写因子を調べることによって骨型ALPの機能の解析の一端を明らかにすることである。骨型ALP遺伝子のプロモーター領域からループを形成する塩基配列を検討し、この配列のオリゴヌクレオチドを用いて、マウス骨芽細胞様MC3T3-E1細胞の核タンパク質を抽出してゲルシフト分析を行ったところDNA結合活性が認められた。さらに、DNAに結合するタンパク質について明らかにするために、この配列を複数連結してアフィニティークロマトグラフィーを用いてタンパク質の精製を行ったところ3種類のタンパク質が精製された。今後は、この3種類のタンパク質についてアミノ酸配列の解析に充分な量が得られるまで精製を続け、アミノ酸配列を決定し、さらにDNA配列の解析を行って骨型ALPの発現を制御するシグナルの解析ならびに機能解析を行いたいと考えている。

血清总碱性磷酸酶（ALP）活性先前已在临床诊断中用作骨生成的标志。此外，骨型ALP被认为是成骨细胞成熟的标志物，众所周知，这种活动的增加对于钙化具有非常重要的意义。但是，它的功能尚未完全理解，并且正在等待未来的研究。另一方面，了解转录因子的趋势可以是调节由转录因子控制的基因表达的信号的指标，并且可以成为了解基因功能的线索。这项研究的目的是通过检查调节骨型ALP基因的新型转录因子来阐明骨型ALP功能的一部分。检查了从骨型ALP基因的启动子区域形成环的核苷酸序列，并使用该序列的寡核苷酸和凝胶移位分析进行了小鼠成骨细胞状成骨细胞状成骨细胞样MC3T3-E1细胞的核蛋白，以找到DNA结合活性。此外，为了阐明与DNA结合的蛋白质，将这些序列的多个连接起来，并使用亲和色谱法纯化蛋白质以纯化三种类型的蛋白质。将来，我们希望继续纯化，直到获得这三种类型的蛋白质的数量足以分析氨基酸序列，确定氨基酸序列，然后分析DNA序列以分析控制骨型ALP表达的信号，以及功能分析。