蝸牛螺旋神経節細胞の神経伝達におけるNMDAレセプターの役割-光学的膜電位計測法を用いて-

NMDA 受体在耳蜗螺旋神经节细胞神经传递中的作用 - 使用光学膜电位测量 -

基本信息

批准号：
11771023
负责人：
土井直
金额：
$ 0.45万
依托单位：
Kansai Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

NMDAレセプターのε1サブユニットとε4サブユニットのジーンを欠失させたノックアウトマウスとワイルドマウスの蝸牛螺旋神経節細胞を比較検討するために、有毛細胞から蝸牛螺旋神経節細胞を含むコルチ器を取り出し、器官培養を行い実験材料とした。有毛細胞を電気刺激し、蝸牛螺旋神経節細胞より得られた光学的シグナルを加算平均する事と、同時に多数個の蝸牛螺旋神経細胞からの光学的シグナルを取得することができるようになり、単離し培養を行った細胞よりは、光学的シグナルの信号雑音比が上昇し、蝸牛螺旋神経節細胞における薬理学的検討が可能と考えられた。実際に、NMDAレセプターとnon-NMDAレセプターの関与を検討するために、細胞外液のカルシウム濃度による変化、細胞外液のマグネシウムによる影響、さらにNMDAレセプターとnon-NMDAレセプターに特異的なアンタゴニストであるAPV、CNQXを用いて検討を行ってきたが、器官培養を行ったコルチ器の状態により、反応が一定とならず、非常に不安定な結果であり、薬理学的な効果を判定するに至らなかった。そこで、第8脳神経関連神経核(蝸牛神経核、前庭神経核)を含む脳幹スライス標本を用いて、螺旋神経節細胞から少し中枢の神経伝達におけるNMDAレセプターの役割を検討することとした。ワイルドマウスの第8脳神経関連神経核を含む脳幹スライスの第8脳神経断端を電気刺激することによる、各神経核での膜電位の光学的計測を行い、膜電位感受性色素を用いた膜電位変化の測定が有用であることを確認し論文報告を行った。本年度内にNMDAレセプターのε1サブユニットとε4サブユニットのジーンを欠失させたノックアウトマウスとの比較検討を行うことができなかったので今後、ワイルドマウスとノックアウトマウスの第8脳神経関連神経核での反応の違いや、薬理学的検討を引き続き行っていく予定である。

为了比较 NMDA 受体 ε1 和 ε4 亚基基因已被删除的敲除小鼠和野生小鼠的耳蜗螺旋神经节细胞，从毛细胞中提取了含有耳蜗螺旋神经节细胞的柯蒂器官。培养并用作实验材料。电刺激毛细胞，将从耳蜗螺旋神经节细胞获得的光信号相加并平均，同时从大量耳蜗螺旋神经元获取光信号，与分离和培养的细胞相比，信噪比变得可能。光信号比率较高，认为可以对耳蜗螺旋神经节细胞进行药理研究。事实上，为了检查NMDA受体和非NMDA受体的参与，我们研究了由于细胞外液中钙浓度的变化、细胞外液中镁的影响以及NMDA受体和非NMDA受体的影响。但由于进行器官培养的柯蒂氏器官的状态，反应不一致，结果极不稳定，无法确定实际效果。因此，我们决定使用含有第8脑神经相关核（耳蜗核、前庭核）的脑干切片制剂来研究NMDA受体在从螺旋神经节细胞到中枢神经系统的神经传递中的作用。通过电刺激含有第 8 脑神经相关神经核的野生小鼠脑干切片的第 8 脑神经残端，我们对每个神经核的膜电位进行了光学测量，并使用膜电压敏感染料测量了膜电位的变化。认为这种测量是有用的，并在论文中报告了这一点。由于今年内我们无法与NMDA受体ε1和ε4亚基基因被删除的敲除小鼠进行比较研究，因此我们将在野生小鼠和敲除小鼠的第8脑神经相关核中进行比较研究我们计划继续调查反应和药理学研究的差异。