抗精神病薬投与によるラット脳内NMDA型受容体サブユニットの変化について

抗精神病药物给药引起大鼠脑内 NMDA 型受体亚基的变化

基本信息

批准号：
11770564
负责人：
豊田裕敬
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Osaka Medical College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

NMDA型受容体はグルタミン酸受容体の1つであり、その拮抗剤であるphencyclidineが精神分裂病様症状を発現させることから、精神疾患との関連が検討されてきた。これまで我々はNorthern blot法およびin situ hybridization法による検討を行い、抗精神病薬投与がNMDA型受容体サブユニットmRNA発現量に有意な変化をもたらすことを報告した。平成12年度にはさらにWestern blot法を用い、抗精神病薬投与によるNMDAR1、R2A、R2B、R2Cサブユニットのタンパク量の変化について検討した。【方法】実験にはWistar系雄性ラット(240.260g)20匹を用いた。Haloperidol投与群、Sulpiride投与群、Clozapine投与群(各n=5)には、それぞれHaloperidol(3mg/kg)、Sulpiride(100mg/kg)、Clozapine(30mg/kg)を腹腔内投与した。対照群(n=5)には生理食塩水を腹腔内投与した。薬物投与から2時間後にネンブタール麻酔下で灌流固定を行い、全脳を摘出した後大脳、小脳に分離し、分画遠心法を用いて膜画分を調整した。免疫定量にはNMDAR1,R2A,R2B,R2Cサブユニットに対する特異抗体を用い、ECL Western blot detection system(Amersham)で免疫陽性バンドを検出した。免疫陽性バンドの定量にはNIH Imageを用い、統計にはone-way ANOVAを用いた。【結果と考察】Haloperidol急性投与群では、小脳のNMDA受容体R2Bサブユニットの蛋白量がコントロール群と比べて有意に減少していたが、大脳では有意な変化を認めなかった。Sulpiride急性投与群においても同様の結果が得られた。Clozapine急性投与群では、大脳においてNMDA受容体R2A、2B、2Cサブユニット蛋白量の有意な増加を認めた。NMDA受容体R1サブユニットについては、各薬剤とも大脳及び小脳において有意な変化は認めなかった。抗精神病薬急性投与によりラット脳内NMDA受容体R2サブユニットに蛋白レベルで有意な変化がみられたことより、抗精神病薬の作用機序にドーパミン?グルタミン酸相互作用を介したNMDA受容体の機能変化が関与する可能性が示唆された。上記結果は平成12年度日本神経精神薬理学会年会において発表を行ったが、現在脳内部位別、さらに慢性投与による変化について追加実験を行っている。

NMDA型受体是谷氨酸受体之一，其苯二肽的拮抗剂会导致类似精神分裂症的症状，因此已经研究了其与精神疾病的关联。到目前为止，我们已经使用北印迹法和原位杂交方法研究了结果，并报告说抗胆汁剂药给药会导致NMDA型受体亚基中mRNA表达水平的显着变化。在2000年，我们进一步使用了Western印迹方法来检查NMDAR1，R2A，R2B和R2C亚基的蛋白质水平因抗精神病药的变化。 [方法]使用20个Wistar雄性大鼠（240.260G）进行实验。氟哌啶醇（3 mg/kg），硫酸（100 mg/kg）和氯氮平（30 mg/kg）分别在氟哌啶醇组，硫酸盐（30 mg/kg）组的腹膜内给予。对照组（n = 5）用生理盐水腹膜内施用。药物给药后两个小时，在nembutal麻醉下进行灌注，并切除整个大脑后，将细胞分离成大脑和小脑，并使用裂解进行裂解调节膜级分。对于免疫定量，使用了针对NMDAR1，R2A，R2B和R2C亚基的特异性抗体，并使用ECL Western印迹检测系统（Amersham）检测到免疫阳性带。 NIH图像用于量化免疫阳性带，并使用单向方差分析来测量统计。 [结果与讨论]与对照组相比，小脑中NMDA受体R2B亚基的蛋白质含量显着降低，但在大脑组中未观察到显着变化。急性硫酸基团获得了相似的结果。在急性氯氮平组中，在大脑中观察到NMDA受体R2A，2B和2C亚基蛋白的量显着增加。关于NMDA受体R1亚基，在任何一种药物的大脑或小脑中未观察到显着变化。急性抗精神病药物显示出大鼠脑在蛋白水平上NMDA受体的R2亚基的显着变化，这表明抗精神病药作用机理可能涉及通过多巴胺 - 谷氨酸相互作用改变NMDA受体功能变化。上述结果是在日本神经心理学学会2000年会上提出的，目前正在对大脑地区长期给药引起的变化进行其他实验。