ウエルシュ菌エンテロトキシン受容体の膜孔形成機構の解析

产气荚膜梭菌肠毒素受体膜孔形成机制分析

• 批准号: 11770140
• 负责人: 片平 じゅん
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770140/
• 关键词: 膜孔形成性細菌毒素; 受容体; 食中毒; トポロジー

1.CPE結合部位の同定前年度に明らかにしたCPE受容体の2番目の細胞外領域が、毒素感受性に必須であるという知見に基づき、同領域とグルタチオンSトランスフェラーゼの組換え融合タンパクを発現・精製し、CPEをプローブとして用いたリガンドブロット法を行なった.その結果、この領域にCPEが直接結合することを明らかにできた.スキャッチャード・プロットの解析から、同領域とCPEとの結合の親和性は、1.0×10^8M^<-1>とCPE受容体発現細胞に対する結合親和性とほぼ等しいことを明らかにした.したがって、CPE受容体の2番目の細胞外領域が、CPEの結合部位として機能すると結論付けた.2.CPE受容体の大量発現系の確立CPE受容体のバキュロウイルスでの大量発現系を確立した.培養液1Lあたり約0.1mgのCPEが得られた.現在、CPEの膜孔形成機構をさらに詳細に解析するために、精製CPE受容体をリポソーム中に再構築し、無細胞系でのCPEの機能アッセイの確立を試みている.

1。基于在CPE受体中揭示的CPE受体的第二个外部区域对于毒素敏感性至关重要，在同一区域表达，谷胱甘肽S-转移酶纯化。并将CPE作为探针。 8M^<-1>表明，它几乎等于与CPE受体表达细胞的结合亲和力。获得了大量的CPE，目前获得了约0.1 mg的培养溶液。在无单元格中建立CPE函数测定。

项目成果

Fujita,K.,Katahira,J., et al.: "Clostridium perfringens enterotoxin binds to the second extracellular loop of Claudin-3, a tight juncition integral membrane protein"FEBS Letters. 476. 258-261 (2000)

Fujita,K.、Katahira,J. 等人：“产气荚膜梭菌肠毒素与 Claudin-3（一种紧密连接整合膜蛋白）的第二个细胞外环结合”FEBS Letters。