歯周ポケット底部を再現した3次元立体培養系の応用による歯周炎の病態解析

应用三维培养系统再现牙周袋底部，对牙周炎进行病理分析

基本信息

批准号：
10771218
负责人：
湯本浩通
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

上皮細胞から上皮下の細胞への炎症波及機構を解明する事を目的に,上皮細胞内のシグナル伝達物質に着目し,歯周病患者より採取した歯肉組織片を用いて,主要な細胞内シグナル伝達物質であるphosphorylated Mitogen-Activated Protein kinase(MAPK)に対するモノクローナル抗体で免疫染色を行った。その結果,主に上皮細胞および血管内皮細胞に特異的にMAPKのリン酸化が認められた。そこでヒト口腔由来上皮細胞ならびにヒト臍帯静脈内皮細胞を用いた培養系に歯周病関連細菌Eikenella corrodensの全菌体ならびに培養上清を添加・刺激して,上皮細胞および上皮下の細胞,特に血管内皮細胞に対する影響を調べた。上皮細胞にはMAPKの経時的なリン酸化(活性化)が認められ、さらに血管内皮細胞増殖因子(VEGF)の産生増強がmRNAと分泌蛋白の両レベルで認められた。このVEGFのmRNA発現増強は、血管内皮細胞においても認められた。またE.corrodens培養上清で刺激すると、血管内皮細胞は細胞増殖促進効果を示した。血管内皮細胞に対しては、Inter Cellular Adhesion Molecule-1(ICAM-1),Vascular Cellular Adhesion Molecule-1(VCAM-1)のmRNA発現の増強も認められた。上皮細胞に認められたシグナル伝達物質(MAPKおよびp38)のリン酸化(活性化)を各特異的阻害剤(MEK-1 inhibitor,p38 inhibitor)で抑制すると、Interleukin-8およびICAM-1の発現が抑制された。また,Protein Kinase C阻害剤もICAM-1の発現誘導を抑制した。本研究により歯周病関連細菌で刺激された歯周ポケット上皮細胞から上皮下組織を構成する細胞への炎症波及は,上皮細胞内でシグナル伝達物質の活性化を介した様々な炎症性メディエーター・細胞増殖因子の産生が誘導され,上皮下の細胞に細胞増殖促進や接着分子の発現誘導が生じ,急性あるいは慢性的な炎症反応が増強される機構であることが示唆された。

为了阐明从上皮细胞到上皮细胞的炎症机制，上皮细胞内的信号传感器集中在集中，并用针对主要的细胞内信号传感器的单克隆抗体进行免疫染色，并使用磷酸化的磷酸化蛋白酶（MAP）促进蛋白质酶（MAP）的磷酸化病毒（MAP），将其与磷酸化的患者（MAP）进行了碎片（具有针对主要细胞内信号传感器的单克隆抗体。结果，主要在上皮细胞和血管内皮细胞中观察到MAPK磷酸化。加入牙周疾病相关细菌的总细胞和培养上清液，并使用人口腔衍生的上皮细胞和人脐静脉细胞刺激培养系统，并刺激对上皮细胞和上皮下细胞（尤其是血管内皮细胞）的影响。在MRNA和分泌蛋白水平上均观察到上皮细胞表现出MAPK的磷酸化（激活），并增强了血管内皮细胞生长因子（VEGF）的产生。在血管内皮细胞中也观察到了这种增强的VEGF的mRNA表达。此外，当用腐蚀性大肠杆菌培养上清液刺激时，血管内皮细胞显示出细胞增殖作用。在血管内皮细胞中，还观察到细胞间粘附分子1（ICAM-1）和血管细胞粘附分子-1（VCAM-1）的mRNA表达增强。在上皮细胞中发现的信号传感器（MAPK和p38）抑制磷酸化（激活），每个特定抑制剂（MEK-1抑制剂，p38抑制剂）抑制了白介素-8和ICAM-1的表达。此外，蛋白激酶C抑制剂还抑制了ICAM-1表达的诱导。这项研究表明，由牙周袋袋中的上皮细胞刺激的炎症性波纹由牙周疾病相关细菌刺激到构成上皮下组织的细胞，是一种刺激各种炎症介质和细胞生长因子的产生的机制，通过在上皮细胞中的激活，从而产生各种炎症性介体和细胞生长因子，从而产生上皮细胞，从而促进了促进的促进分子的成分，从而促进了分子的成分，从而促进了分子的粘附成分。急性或慢性炎症反应。