矯正的歯の移動における歯根膜特異遺伝子の同定

正畸牙齿移动中牙周膜特异性基因的鉴定

基本信息

批准号：
10771180
负责人：
宮本学
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10771180/
关键词：
歯根膜細胞遺伝子発現 PCR

项目摘要

1.Differential display PCR法による発現遺伝子のdisplayと特異遺伝子の検索6週令ラットの上下顎切歯より歯根膜を,大腿骨より骨膜を剥離しoutgrowth法により初代培養細胞を調整した。両細胞から調整したtotal RNAの逆転写物に対して、differential display PCRを行った。8種類のプライマーの組み合わせによる反応産物を展開し,再度増幅可能であったクローン11種の塩基配列を決定した。このうちひとつのクローンは細胞骨格蛋白質遺伝子であり,その他10クローンは既知の遺伝子および既存のsequence tagとの有意な相同性はみられなかった。次に未知の遺伝子断片3種よりprimerを設計し、RT-PCR法により歯根膜、骨膜細胞間でのmRNA発現の差異を検討した。その結果両細胞間でmRNAの発現量の明らかな差がみられなかった。2.歯根膜細胞の発現する骨関連蛋白質の遺伝子について歯根膜細胞から調整したtotal RNAの逆転写物をもとに,既知の骨関連蛋白質遺伝子の発現をRTR-PCR法Northern blot法により検討した。歯根膜細胞は培養初期より,osteopontin,osteonectin,bone sialoprotein遺伝子を発現しており,培養期間により顕著な変動はみられなかった。Alkaline phosphatase遺伝子は培養期間につれて発現が増強され,また骨系細胞の分化を促進すると考えられているdexamethasoneの添加により著しく発現を増強した。これらの結果より歯根膜細胞が遺伝子の発現において骨系の細胞と類似したパターンを示すことが明らかとなった。

1.差异显示PCR法展示表达基因并寻找独特基因采用生长法去除6周龄大鼠上下切牙牙周膜和股骨骨膜制备原代培养细胞。对从两种细胞制备的总RNA的逆转录本进行差异显示PCR。我们使用 8 种引物组合开发了反应产物，并确定了 11 个可重新扩增的克隆的核苷酸序列。其中一个克隆是细胞骨架蛋白基因，其他 10 个克隆与已知基因或现有序列标签没有显着同源性。接下来，我们从三个未知基因片段设计了引物，并使用 RT-PCR 检查了牙周膜和骨膜细胞之间 mRNA 表达的差异。结果，两种细胞之间的mRNA表达水平没有明显差异。 2.基于牙周膜细胞总RNA的逆转录，我们利用RTR-PCR和Northern blot方法检测了已知的骨相关蛋白基因的表达。牙周膜细胞从培养早期就表达骨桥蛋白、骨连接蛋白和骨唾液蛋白基因，并且根据培养时间没有观察到显着变化。碱性磷酸酶基因的表达随着培养时间的延长而增加，并且通过添加地塞米松而显着增强，这被认为可以促进骨细胞的分化。这些结果表明，牙周膜细胞表现出与骨细胞相似的基因表达模式。