形質細胞性腫瘍の発生に関与する癌遺伝子の単離同定とその機能解析

浆细胞肿瘤发生过程中癌基因的分离鉴定及其功能分析

基本信息

批准号：
10770514
负责人：
飯田真介
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770514/
关键词：
多発性骨髄腫染色体転座癌遺伝子 MUM1 IRF4遺伝子 14q+

项目摘要

免疫グロブリン重鎖遺伝子(IgH)領域を含む染色体転座(14q+)は、80%の多発性骨髄腫(MM)、その前癌病態である半数以上のMGUS症例において認められる事から本症の発癌早期に関与していると推定される。我々はt(6;14)(p25;q32)転座により活性化される原癌遺伝子としてMUM1/IRF4遺伝子を単離した。しかし本転座は染色体末端を含み通常の染色体診断では同定できない。そこでMUM1を含む400kbにわたるPACによる遺伝子地図を作成しこれらとIgH領域のYAC/bacteriophageをプローブとしてdouble colour fluorescence in situ hybridization(DCFISH)による診断法を確立した。その結果MM細胞株の17.6%、症例の20.1%においてt(6;14)転座もしくはIgHのMUM1近傍への挿入が認められることを見い出した。同時にパルスフィールドゲル電気泳動法を用いて転座切断点を解析したところ約400kbの範囲に及んでいる事を見いだした。転座の結果MUM1は常にIgH3'αエンハンサーと近接し過剰発現することを証明した。またMM症例の臨床的特徴については6;14転座陽性例と陰性例において有意な差は認めなかった(Leukemia 13;1812-1816,1999)。さらにMUM1蛋白の正常リンパ節およびリンパ腫における発現を検討した。MUM1はCD38陽性活性化リンパ球の核に強く発現する事、胚中心明領域に分布する7,9%のBリンパ球において発現している事を見い出した。リンパ腫細胞における発現を検討した結果、マントル細胞リンパ腫や濾胞性リンパ腫においては全く発現していないが胚中心以降B細胞に由来すると思われるびまん性大細胞型リンパ腫においては73%の症例で過剰発現している事を見い出した。すなわち多くのBリンパ腫細胞は生理的もしくは病的にMUM1発現が亢進している事を示すものである(Leukemia 14;in press,2000)。またB細胞における腫瘍化能を検討するためEμSVプロモーター下に発現させたMUM1トランスジェニックマウスならびにレトロウイルスを用いて遺伝子導入した安定B細胞株の作成を行い現在その解析を継続している。さらに14q+上で活性化される新規遺伝子を同定するためMM細胞に認められたt(1;14)(q21;q32)およびt(1;14)(p36;q32)転座切断点の単離を行い1q21に存在するMUM2,MUM3遺伝子(Blood92:2093a,1998)および1p36に存在するE3遺伝子を同定した。またMM細胞で高頻度に転座している20q11座の2切断点を約1.5MbのYAC上に同定し原因遺伝子の検索を継続している。

在80％多功能骨髓瘤（MM）中发现了含有免疫球蛋白重链（IGH）区域（14q+）的染色体迁移（14q+），而超过一半的mgus病例是先前的癌症。我们是T（6; 14）（P25; Q32）MUM1/IRF4基因作为通过迁移激活的生癌基因。但是，该座椅未通过正常的染色体诊断（包括染色体末端）来识别。因此，我们创建了一个400KB的PAC图，包括MUM1，并建立了具有双色荧光（DCFISH）的诊断方法，并用这些和IGH面积YAC/噬菌体作为探针。结果，发现将17.6％的MM细胞份额和20.1％的病例插入了T（6; 14）或MUM1附近的IGH中。同时，我们使用脉冲场凝胶游泳方法分析了转移点，发现它大约是400kb范围。搬迁的结果是，MUM1始终证明它接近IGH3'α增强子和Overos。 6个恢复阳性病例与MM病例的临床特征之间没有显着差异（白血病13; 1812-1816，1999）。另外，检查了正常淋巴结和淋巴瘤中MUM1蛋白的表达。发现MUM1在CD38阳性活化淋巴细胞的核中强烈表达，并且在分布在胚胎计量中心的7,9％的B淋巴细胞中表达了MUM1。由于检查了淋巴瘤细胞中的表达，在地幔细胞淋巴瘤和细胞淋巴瘤的情况下，在73％的病例中，它在73％的病例中被过高，但根本没有表达，但被认为是从B细胞中得出的，因为胚胎。换句话说，许多B淋巴瘤细胞表明MUM1表达在生理或病态上得到增强（白血病14；在Presss，2000年）。此外，使用在EμSV启动子下表达的MUM1转基因小鼠创建MUM1转基因小鼠和逆转录病毒，以检查B细胞中的肿瘤化能力，目前正在进行分析。此外，t（1; 14）（q21; q32），t（1; 14）（p36; q32）MM细胞识别的分离点以鉴定在14q+ Mum2，Mum3基因上激活的新基因（血液92：2093a，，，，血液92：2093a，， 1998年）和136中的E3基因在1q21中存在。此外，在约1.5MB的YAC上鉴定出经常在MM细胞中转移的20q11座椅的两个切割点，并且搜索因果关系基因仍在继续。