脳形成障害の発生機序に関する分子生物学的研究-血小板活性化因子(PAF)分解酵素の関与-

脑形成障碍发病机制的分子生物学研究 - 血小板活化因子（PAF）降解酶的参与 -

• 批准号: 09770576
• 负责人: 清水 正樹
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770576/
• 关键词: 滑脳症; 血小板活性化因子; 血小板活性化因子受容体; 遊走障害; 脳形成障害; 遺伝子導入

Miller-Dicker症候群の責任遺伝子が血小板活性化因子(Platelet-Activating Factor:PAF)分解酵素(PAFアセチルヒドロラーゼ:PAF-acetylhydrolase)の遺伝子と高い相同性を有することから、脳内のPAFレベルが神経細胞の分化遊走に深く関与しているのではないかとの着想のもと研究を計画した。具体的には1.ヒトPAF受容体cDNAを培養神経細胞内へ導入し、PAF受容体を過剰発現する神経細胞がPAFあるいは他の神経栄養因子に如何に反応するかを検討する。2.各種の脳奇形について、PAF、PAF-acetylhydrolase遺伝子の発現をそれぞれに対するcRNAを用いたin situハイブリダイゼーション、あるいは抗体による免疫組織化学染色にて検討する。研究成果:PAF受容体cDNAのin vitroでの神経細胞内への導入:PAF受容体あるいはPAF-acetylhydrolasecDNAを組み込んだ遺伝子発現ベクターを培養神経細胞ヘエレクトロポレーションにて導入し、PAF受容体の高発現クローンをノーザンブロットにてスクリーニングすることを試みた。遺伝子導入後、数クローンを得たが、ノーザンブロットでは明かなPAF受容体mRNA発現は検出されなかった。さらに他の遺伝子導入法とロゼットアッセイを組み合わせて、発現クローンをスクリーニングしたが、適切なクローンを得ることができなかった。現在、PAF受容体cDNAのtransientトランスフェクタントおいて、PAFと同時に各種の神経栄養因子を投与し、神経細胞の応答性を指標に、PAFレベルが神経細胞の分化・成長・遊走に如何なる役割を果たすかを検討している。また、各種の脳形成障害剖検例につき、PAF,PAF-acetylhydrolase RNAに対するcRNAをプローブとしたinsituハイブリダイゼーションあるいは免疫組織化学染色を行い、これらの遺伝子発現を検討したが、剖検材料の固定条件の違いからか、一定の結果が得られなかった。今後は、マウスの脳形成障害モデルを用いて、同様の実験を試みる予定である。

由于导致米勒-迪克综合征的基因与血小板活化因子（PAF）降解酶（PAF乙酰水解酶）的基因具有高度同源性，因此大脑中的PAF水平与这可能密切相关，因此我们计划了我们的研究。参与细胞的分化和迁移。具体来说，1.我们将把人PAF受体cDNA引入培养的神经元中，并检查过度表达PAF受体的神经元如何响应PAF或其他神经营养因子。 2.使用每种cRNA的原位杂交或使用抗体的免疫组织化学染色检查各种脑畸形中PAF和PAF-乙酰水解酶基因的表达。研究结果：将PAF受体cDNA体外导入神经细胞：通过电穿孔将掺有PAF受体或PAF-乙酰水解酶DNA的基因表达载体导入培养的神经细胞中，对PAF受体扩增表达克隆进行了筛选。通过北方印迹。基因导入后，获得了多个克隆，但Northern blot未检测到明确的PAF受体mRNA表达。此外，结合其他基因转移方法和玫瑰花试验来筛选表达克隆，但没有获得合适的克隆。目前，在PAF受体cDNA的瞬时转染体中，我们与PAF同时施用各种神经营养因子，并以神经元反应性为指标，研究PAF水平在神经元分化、生长和迁移中的作用。考虑是否实现这个目标。此外，对各种脑形成障碍的尸检病例进行原位杂交或使用PAF的cRNA、PAF-乙酰水解酶RNA作为探针的免疫组织化学染色，研究这些基因的表达，但尸检的固定条件存在差异也许正因为如此，我无法获得一致的结果。未来，我们计划使用大脑形成障碍的小鼠模型尝试类似的实验。