B細胞分化におけるBtkの役割:Btkトランスジェニックマウスの解析

Btk 在 B 细胞分化中的作用：Btk 转基因小鼠的分析

• 批准号: 09770213
• 负责人: 植原 昭治
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770213/
• 关键词: Btk; トランスジェニックマウス; クラス変換; IL-5; CD38; DNAプロテインキナーゼ; Blimp-1; Bcl-2; チロシンキナーゼ; 免疫不全; 遺伝子治療

本研究は、B細胞に発現しているチロシンキナーゼ、BtkのB細胞発生および分化における役割を明らかにすることを研究目的としている.(1)sIgD陽性の牌臓B細胞を抗CD38抗体、CS/2とIL-5で刺激するとIgMのみならずIgGlの産生が誘導されたが、IgA産生は見られなかった.CS/2やIL-5の単独刺激は無効であった。しかし、腹腔内B細胞をCS/2とIL-5で刺激するとIgGlのみならずIgA産生が見られることがわかった.このことより、B細胞の局在する解剖学的な部位により、B細胞のIgA産生誘導シグナルが異なることがわかった.CS/2と相乗的にB細胞に作用しIgGl産生を惹起するサイトカインを調べたところ、IL-5のみが有効であり、IL-4は無効であった。IL-4やSTAT6遺伝子破壊マウスのB細胞もCS/2とIL-5に応答してIgGlを産生したことから、このシステムはIL-4に非依存性であることがわかった。CS/2刺激されたB細胞をIL-5で刺激するとμからγ1への遺伝子組み替えが惹起されることが、スイッチサークルDNAを増幅し解析してはじめて明らかになった。しかし、CS/2刺激により非翻訳型γ1mRNAの転写が起こるが、μからγ1への遺伝子組み替えは起こらない。クラス変換の頻度とKu70/Ku80複合体の活性化の程度やDNAプロテインキナーゼ活性とは相関しなかった。しかし、興味あることにB細胞特異的な転写因子で、Ig産生細胞への分化に関与すると云われているBlimp-1の発現の程度と相関した。(2)Btkの機能を探るべく、Btk遺伝子破壊マウスに野生型Btk遺伝子導入(Btk^<-/->/Btk^<wt>-Tg)マウスまたは変異Btk遺伝子を導入した(Btk^<-/->/Btk^<xid>-Tg)マウスを作った.いずれのマウスも正常に生まれた.Btk^<-/->マウスで見られたB細胞不全はBtk^<-/->/Btk^<wt>-Tgマウスでは回復していたがBtk^<-/->/Btk^<xid>-Tgマウスでは見られなかった.とりわけ、CS/2とIL-5に依存性のIgG1へのクラス変換は全く見られなかった.これらのことより、BtkはB細胞のクラス変換に重要であることがわかった.

这项研究旨在阐明B细胞中表达的酪氨酸激酶BTK在B细胞发育和分化中的作用。 （1）用抗CD38抗体，CS/2和IL-5刺激SigD阳性瓷砖B细胞不仅诱导了IgM，而且还诱导了IgGL的产生，但未观察到IGA产生。仅刺激CS/2和IL-5是无效的。然而，发现腹膜内B细胞用CS/2和IL-5刺激时，不仅观察到IgA的产生，而且还观察到IgGL。这表明，B细胞中诱导IgA产生的信号取决于B细胞所在的解剖位点。当我们检查与CS/2协同作用于B细胞的细胞因子并诱导IgGL产生，仅IL-5有效，IL-4无效。来自IL-4和STAT6基因的B细胞破坏了小鼠，也会响应CS/2和IL-5产生IgGL，表明该系统是IL-4独立的。仅通过对开关圆DNA的扩增和分析来揭示，用IL-5刺激CS/2刺激的B细胞会导致μ到γ1的基因重组。但是，CS/2刺激会导致未翻译的γ1mRNA转录，但不会导致μ到γ1的遗传重组。类转化的频率与KU70/KU80复合物或DNA蛋白激酶活性的激活程度无关。然而，它在Blimp-1的表达程度上是一种b细胞特异性转录因子的表达程度，据说与分化为产生Ig的细胞有关。 （2）为了探索BTK的功能，我们创建了野生型BTK基因转导（BTK^< - / - >/BTK^<wt> -TG）小鼠或转染的BTK基因中断的小鼠。两只老鼠正常出生。 BTK^< - / - >/btk^<wt> -tg小鼠在BTK^< - / - >/btk^<xid> -TG小鼠中恢复的B细胞故障，但在BTK^< - >/btk^<xid> -TG小鼠中却没有。特别是，没有发现任何类转换为IgG1取决于CS/2和IL-5。这些发现表明，BTK对于B细胞的类别转化很重要。

项目成果

Numata F.et al.: "The xid mutation plays an important role in delayed development of munne acquired immunodeficiency syndrcme" International Immunology. 9. 139-146 (1997)

Numata F.等人：“xid 突变在小鼠获得性免疫缺陷综合征的延迟发展中发挥着重要作用”《国际免疫学》。

Mizoguchi C,et al.: "Interleukin-5 Induces lgG1 Isotype Switch Recombination in mouse CD38-Activated slgD-Positive B Lymphocytes." J.Immunol.

Mizoguchi C 等人：“Interleukin-5 在小鼠 CD38 激活的 slgD 阳性 B 淋巴细胞中诱导 lgG1 同型转换重组。”