アンチセンス法を用いた脊髄痛覚伝達・増強機構に関与するG蛋白質の解析

反义方法分析参与脊髓疼痛传递/增强机制的G蛋白

基本信息

批准号：
09770057
负责人：
栗原崇
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770057/
关键词：
痛覚 G蛋白質アンチセンス法脊髄

项目摘要

本年度も引き読き成熟ラット及び新生ラットにおける様々な即時痛・慢性痛モデルに対する各種G蛋白質αサブユニット(Gα)アンチセンス及びセンスオリゴデオキシヌクレオチド(アンチセンス:AS;センス:S)の効果を検討した。成熟ラットにおいては様々な即時痛刺激(機械、熱、化学的刺激)に対し、Gα(Gα_q、Gα_<ll>、Gα_o、Gα_<i-1>、Gα_<i-2>、Gα_<i-3>)AS並びにSはほとんど効果がなかった。炎症性疼痛モデルとしてはホルマリンテストの第2相反応を指標に用い、Gα_q及びGα_<ll>ASの効果を検討したところ、Gα_qASは第2相反応を有意に抑制したが、Gα_<ll>ASはほとんど効果を示さなかった。両者のSは共に効果を示さなかった。神怪因性疼痛モデルとしては坐骨神経絞扼神経損傷モデルを用いた。神経損傷により誘発される熱性痛覚過敏及び機械的異痛現象発現の時間経過はGα_oASにより有意に延長されるが、Sは効果を示さないことが示唆された。一方Tail flick法を用いて観察されるモルヒネの鎮痛効果に対するGα_i及びGα_oASの効果を検討したところ、Gα_<i-l>ASは有意にモルヒネの鎮痛効果を抑制したが、Gα_oASはほとんど効果を示さず、マウスにおける報告とは異なる結果を得た。上記のASの効果は蛋白質発現減少を伴っていることをウニスタンブロット法にて確認した。以上の結果に関して現在論文作成中である。新生ラットにおいては強度電気刺激により誘発される脊髄多シナプス伝達を抑制する神経伝達物質(GABA、オピオイド)に対するGα_iAS及びSの効果を検討した。ASあるいはSを髄腔内に投与して2日後脊髄を摘出し実験を行った。その結果Gα_<i-l>ASはオピオイド(エンケファリン、エンドモルフィン)の濃度依存性抑制効果を減弱させたが、GABA_B作用薬バクロフェンの効果に対しては影響しなかった。Gα_<i-2>及びGα_<i-3>については現在検討中である。

今年，各种G-蛋白α亚基（Gα）抗Sensens（Gα）抗sensens and sensens and Sense寡头核苷酸（抗sensens：AS; sense：Sense：S）的影响老鼠和新老鼠。在成熟的大鼠中，各种直接疼痛刺激（机器，热，化学刺激）包括Gα（Gα_Q，Gα__<ll>，Gα_O，Gα__O，Gα_<i-1>，Gα__<i-2>，gα__<i-.3>） AS和S非常有效。作为福尔马林测试的第二个相反的指标，作为炎症模型，Gα_Q和Gα_<ll>作为效果几乎没有效。两个S没有显示任何效果。作为神怪兽模型，使用了坐骨神经nerignic绞死模型。有人提出，gα_OA被gα_OAS显着扩展，但S并未显示为神经损伤诱导的热感觉效果。另一方面，当使用Tail Flick方法观察到GIN_I和Gα_OA的镇痛作用时，Gα__<i-le>显着抑制了Molphine的镇痛作用，但Gα_OAS显着抑制了结果与鼠标中的报告不同。 Usonistan Brot方法被证实，上述效果伴随着蛋白质表达的降低。当前正在创建上述结果。在新的大鼠中，检查了抑制脊髓传播的神经递质（GABA，阿片类药物）的作用，检查由强度电刺激引起的脊髓 - 变性突触。 AS或S施用到腔中，并在两天后去除脊髓并进行实验。结果，gα_<i-l>是降低阿片类药物（enkifarin，末端 - 寄生）的浓度依赖性作用，但不影响gaba_b效应，巴氯芬的作用。 Gα_<i-2>和Gα_<i-3>目前正在考虑。