寄生虫・エキノコックスの糞便内抗原の解析とそれを利用した終宿主診断法の改良と応用

寄生虫和棘球绦虫粪便抗原分析及其终宿主诊断方法的改进和应用

基本信息

批准号：
09760282
负责人：
野中成晃
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、新しく多包条虫成虫排泄分泌(ES)抗原に対するマウスモノクローナル抗体(mAbs)を作製し、糞便内抗原検出法へ利用した。mAbsは9種(Em a-Emi)得られ、Em a、hおよびiの3種はIgG1抗体、Em b-gの6種はIgM抗体であった。多種寄生虫抗原との反応性を調べた結果、3つのグループに分けられ(Em a,Em b-g,Em hとi)、Em hとiは多包条虫成虫および成虫ES抗原とのみ強く反応した。ウエスタンブロッティングはどのmAbsもES抗原とスメア状の反応を示し、多包条虫成虫切片の免疫染色ではmAbs(Em a,c,i)はいずれも成虫テグメントおよび虫体周囲の宿主腸管上皮と反応した。これらの反応が抗原の過ヨウ素酸処理によって喪失したことからmAbsの認識抗原が糖であることが示唆された。そこでEm iおよびES抗原に対するポリクローナル抗体(rAb)を用いたサンドイッチELISA法により糞便内抗原の検出を試みたが、感度の低さが問題となった。感度向上のためにアビジン・ビオチン化酵素複合体法を用い、吸着抗体にrAb、一次抗体にEm i、二次抗体にビオチン化anti-mouse IgG(rAb/Em i/b-AntiM)および吸着抗体にEm i、一次抗体に現法で用いられているビオチン化EmA9を用いる検出系を選択した。検出抗原は熱やホルマリンに対して安定であり、1%ホルマリン、熱処理を施して多包条虫卵を失活させたキツネ剖検材料を用いて各系を比較した。rAb/Em i/b-AntiM検出系と現法(rAb/b-EmA9)は同様の陽性検出率を示し、さらにEm iを用いた新しい検出系はいずれも現法で反応のみられる胞状条虫感染犬糞便とは反応せず、特異性に優れていた。いずれの検出系も単包条虫やフォーゲル包条虫感染動物の糞便内抗原の検出が可能で、他のエキノコックスの終宿主診断にも応用できることが示された。

今年，我们创建了一种针对多囊带绦虫排泄分泌（ES）抗原的新型小鼠单克隆抗体（mAb），并将其用于检测粪便中抗原的方法中。获得9种mAb(Em a-Emi)，其中Em a、h、i 3种为IgG1抗体，Em b-g 6种为IgM抗体。检测与各种寄生虫抗原的反应性，结果分为3组(Em a、Em b-g、Em h、i)，Em h、i仅与多囊绦虫成虫发生强烈反应，而ES抗原则发生强烈反应。 Western blotting显示所有mAb均与ES抗原呈涂片状反应，成虫切片免疫染色显示所有mAb (Em a,c,i)均与成虫体皮和身体周围的宿主肠上皮发生反应。做过。这些反应通过抗原的高碘酸处理被消除，表明单克隆抗体识别的抗原是糖。因此，我们尝试使用针对 Em i 和 ES 抗原的多克隆抗体 (rAb) 的夹心 ELISA 方法检测粪便中的抗原，但灵敏度低成为问题。为了提高灵敏度，我们使用了亲和素-生物素化酶复合物方法，使用rAb作为吸附抗体，Em i作为一抗，生物素化抗小鼠IgG（rAb/Em i/b-AntiM）和吸附抗体作为二抗为此，我们选择了一种使用生物素化 EMA9 的检测系统，该系统在当前方法中使用，作为一抗。检测到的抗原对热和福尔马林稳定，并且使用狐狸尸检材料对每个系统进行比较，其中绦虫卵通过1％福尔马林和热处理灭活。 rAb/Em i/b-AntiM 检测系统与现行方法（rAb/b-EmA9）显示出相似的阳性检出率，并且使用 Em i 的新检测系统既不与感染狗的粪便发生反应，又具有出色的特异性。两种检测系统均能够检测感染单囊带绦虫和沃格尔带绦虫的动物粪便中的抗原，并被证明适用于诊断其他棘球绦虫物种的最终宿主。