分泌顆粒におけるアネキシンのプロテオグリカン認識機構

分泌颗粒中膜联蛋白的蛋白多糖识别机制

基本信息

批准号：
08780555
负责人：
小島京子
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Ochanomizu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08780555/
关键词：
アネキシンプロラオグリカン分泌顆粒レクチン

项目摘要

アネキシンはカルシウム依存的にリン脂質に結合するタンパク質で、様々な上皮細胞や免疫細胞において細胞内小胞膜や顆粒に局在していることから、細胞内小胞形成、輸送等に関与することが示唆されているがその機構の詳細は明らかにされていない。申請者らは膵臓、腎臓、などの表面極性を持つ細胞で、グリコサミノグリカン鎖やシアロ糖タンパク質を認識、結合するレクチンを探索しているところ、膵臓および腎臓から単離・精製した新規のレクチンがアネキシンIVであることを見い出し、その後アネキシンVおよびVIも同様な糖結合活性を持つことを明らかにした。本研究ではアネキシンと特定のグリコサミノグリカンあるいはシアロ糖タンパク質との相互作用が、腺細胞における細胞内顆粒の形成やそれに続く分泌機構に関与する可能性を検討することを目的として、ウシ膵臓および唾液腺の腺房細胞に局在するアネキシンとシアロ糖タンパク質の同定を行った。アネキシンIV、V、VIに対するポリクローナル抗体またはシアロ糖鎖を認識するレクチン(MAM)を使って、組織切片を酵素抗体法で染色したところ、アネキシンIVが膵臓では腺房細胞の頂端部側の細胞質、チモ-ゲン顆粒を含む領域に極性分布していた。チモ-ゲン顆粒の主要な膜糖タンパク質であるGP-2はMAMと強く反応し、膵臓でのMAMレセプターの分布はアネキシンIVの分布と一致したことから、実際にアネキシンIVはそのレクチン活性を介してGP-2と相互作用し、機能する可能性が示唆された。また、ウシ唾液腺の腺房細胞中のアネキシンの局在をウエスタンブロッティング法により調べたところ、アネキシンIV、Vの存在が示された。さらにアネキシンIVの内在性レセプターと考えられる42kDaの糖タンパク質をMAMカラムを用いたアフィニティークロマトグラフィーによって精製することができた。

膜联蛋白是一种以钙依赖性方式与磷脂结合的蛋白质，定位于各种上皮细胞和免疫细胞的细胞内囊泡膜和颗粒中，这表明它们参与细胞内囊泡的形成、运输等。该机制的细节尚未明确。申请人正在寻找一种能够识别并结合具有表面极性的细胞（例如胰腺和肾脏）中的糖胺聚糖链和唾液酸糖蛋白的凝集素，我们发现该凝集素是膜联蛋白IV，后来发现膜联蛋白V和VI也具有类似的糖-结合活性。在这项研究中，我们研究了膜联蛋白和特定糖胺聚糖或唾液酸糖蛋白之间的相互作用是否参与腺细胞内颗粒的形成以及随后的分泌机制，我们鉴定了位于腺泡细胞中的膜联蛋白和唾液酸糖蛋白。当使用针对膜联蛋白IV、V和VI的多克隆抗体或识别唾液酸碳水化合物链的凝集素(MAM)通过酶联免疫吸附法对组织切片进行染色时，发现在腺泡细胞的顶端细胞质中发现了膜联蛋白IV。胰腺中含有酶原颗粒的区域呈极性分布。酶原颗粒的主要膜糖蛋白GP-2与MAM发生强烈反应，并且胰腺中MAM受体的分布与膜联蛋白IV的分布一致，这表明膜联蛋白IV实际上是通过其凝集素活性介导的。它可能与 GP-2 相互作用并发挥作用。此外，当通过蛋白质印迹检查牛唾液腺腺泡细胞中膜联蛋白的定位时，证实了膜联蛋白IV和V的存在。此外，我们能够使用 MAM 柱通过亲和层析纯化 42kDa 糖蛋白，该糖蛋白被认为是膜联蛋白 IV 的内源性受体。