耳下腺腺房細胞におけるアミラーゼ開口放出の分子機構

腮腺腺泡细胞淀粉酶胞吐作用的分子机制

• 批准号: 08771625
• 负责人: 吉垣 純子
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771625/
• 关键词: 分泌; 唾液腺; cAMP; 開口放出; 分泌顆粒

本研究では,耳下腺腺房細胞におけるアミラーゼ分泌に関わるタンパク質の検索を行った.我々は,耳下腺腺房細胞の分泌顆粒に,神経伝達質の開口放出に関わるタンパク質であるVAMP-2が存在しており,cAMP依存的なアミラーゼ分泌に関わっていることを既に報告している.しかし,神経細胞においてVAMP-2と相互作用して膜融合に関わっているsyntaxin 1やSNAP-25は,耳下腺では検出されなかった.そこで,本研究では,耳下腺腺房細胞において,アミラーゼ分泌に関わるVAMP-2以外のタンパク質の検出を試みた.特に,VAMP-2の普遍的なホモログであるcellubrevinや,VAMP-2と直接結合すると言われているsyntaxin 4について,解析を行った.そのために,VAMP familyを共通に認識するウサギポリクローナル抗体(anti-SER4256)を作成し,耳下腺の細胞画分についてウエスタンブロットを行った.その結果,anti-SER4256によって認識される15kDa(p15)および18kDa(p18)のバンドが検出された.p18は,抗VAMP-2抗体によって認識されるバンドと分子量が一致しており,VAMP-2であると考えられた.p15及びp18は共に,ボツリヌストキシンBによって切断された.VAMP-1はボツリヌストキシンBによる切断部位は持たないことから,p15はcellubrevinであると考えられる.また,p15はVAMP-2と同様に,分泌顆粒膜に局在しており,アミラーゼ分泌に何らかの関与をしていることが予測される.また,syntaxin familyの中で,VAMP-2に対する結合能を持つものはsyntaxin 1と4であることが既に報告されている.そこで,抗syntaxin 4抗体を用いて,耳下腺の細胞画分についてウエスタンブロットを行った.その結果,抗syntaxin 4抗体によって認識される32kDaのバンドが膜画分に存在することが明らかになった.syntaxin 4は,VAMP-2と協同して刺激応答性のアミラーゼ開口放出に関わっていることが期待される.

在这项研究中，我们搜索了参与腮腺细胞中淀粉酶分泌的蛋白质。我们已经报道说，VAMP-2是一种涉及腮腺细胞分泌颗粒中神经递质开口释放的蛋白质，参与了CAMP依赖性淀粉酶分泌。然而，在腮腺中未检测到与神经元中与VAMP-2相互作用并参与膜融合的索法素1和SNAP-25。因此，在这项研究中，我们试图检测除VAMP-2以外的蛋白质，这些蛋白质参与了腮腺细胞中的淀粉酶分泌。特别是，我们分析了Cellubrevin，这是VAMP-2的通用同源物和语法4，据说它直接与VAMP-2结合。因此，我们调查了鞋面。通常产生了一种通常识别家族的兔多克隆抗体（抗Ser4256），并在腮腺的细胞分数上印迹。结果，检测到抗Ser4256识别的15kDa（p15）和18KDA（p18）的带。 p18的带与抗VAMP-2抗体识别的条带的分子量相同，被认为是VAMP-2。 p15和p18均被肉毒杆菌毒素B裂解。因为VAMP-1没有肉毒杆菌毒素B的切割位点，因此p15被认为是蜂窝状的。同样，p15位于分泌颗粒膜上，预计将参与淀粉酶分泌。同样，据报道，家族中的语法1和4是具有结合能力的VAMP-2的征毒素。因此，使用抗Sytraxin 4抗体在腮腺细胞部分上进行蛋白质印迹。结果表明，在膜级分中存在抗伴二替肽4抗体识别的32KDA带。与VAMP-2合作，预计语法4将参与刺激响应淀粉酶释放。

项目成果

吉垣純子: "Vesicle-associated membrane protein 2 is essential for cAMP-regulated exocytosis in rat parotid acinar cells : the inhibition of cAMP-dependent amylase release by botulinum neurotoxin B." Journal of Biological Chemistry. 271. 13130-13134 (1996)

Junko Yoshigaki：“囊泡相关膜蛋白 2 对于大鼠腮腺腺泡细胞中 cAMP 调节的胞吐作用至关重要：肉毒杆菌神经毒素 B 抑制 cAMP 依赖性淀粉酶释放。”《生物化学杂志》271。13130-13134 (1996)。