角膜上皮細胞におけるヘムオキシゲナーゼを介した酸化ストレス防御機構の解明

阐明角膜上皮细胞血红素加氧酶介导的氧化应激防御机制

• 批准号: 08771528
• 负责人: 榛村 重人
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771528/
• 关键词: 紫外線; 酸化ストレス; フリーラジカル; ラクトフェリン; 鉄; 抗酸化剤; 蛍光色素; ヘムオキシゲナーゼ

本年度中の実績として、培養角膜上皮細胞における紫外線照射による細胞内過酸化反応の半定量的解析法の確立であり、Exp Eye Res、vo163、519-526に報告した。細胞内過酸化物の測定は蛍光プローブ、5-(and-6)-carboxy-2',7'-dichlorofluorescin(CDCFH)diacetate bis(acetoxymethyl)ester、細胞のviabilityは同様の蛍光プローブであるpropidium iodideにて二重染色して、画像を高感度silicon intensifying(SIT)カメラ(Hamamatsu社)で装備された蛍光顕微鏡(Olympus IMT-2)にてビデオ画像に取り込み、画像解析ソフト(NIHimage)にて解析を行った。細胞内過酸化反応に対して、superoxide dismutase(SOD)に効果は認められなかったものの、カタラーゼと鉄キレート剤であるラクトフェリンとデフェロキサミンに有為な抑制効果があることが判明した。紫外線による過酸化反応に遊離鉄が関与していることが示唆され、主要涙液タンパクであるラクトフェリンに内因性の抗酸化作用がある可能性が示された。

我们今年的成果是建立了培养角膜上皮细胞中紫外线照射诱导的细胞内过氧化反应的半定量分析方法，相关报道发表于Exp Eye Res, vo163, 519-526。为了测量细胞内过氧化物，我们使用荧光探针 5-（和 6）-羧基-2',7'-二氯荧光素 (CDCFH) 二乙酸双（乙酰氧基甲基）酯，为了测量细胞活力，我们使用类似的荧光探针，使用配备高灵敏度硅增感（SIT）相机（Hamamatsu）的荧光显微镜（Olympus）拍摄图像。使用 IMT-2 捕获视频图像并使用图像分析软件 (NIHimage) 进行分析。虽然超氧化物歧化酶（SOD）对细胞内过氧化没有影响，但过氧化氢酶和铁螯合剂乳铁蛋白和去铁胺具有显着的抑制作用。有人提出，游离铁参与了紫外线引起的过氧化反应，并且研究表明，主要泪液蛋白乳铁蛋白可能具有内源性抗氧化作用。

项目成果

Shimmura.S: "Subthreshold UV-radiation-induced peroxide formation in cultured corneal epitheliol cells : the protective effects of lactoferrin" Exp Eye Res. 63. 519-526 (1996)

Shimmura.S：“培养的角膜上皮细胞中阈下紫外线辐射诱导的过氧化物形成：乳铁蛋白的保护作用”Exp Eye Res。