ヒト卵胞液中の黄体化ホルモン結合抑制因子の検討

人卵泡液中黄体生成素结合抑制剂的研究

• 批准号: 08771350
• 负责人: 粉川 信義
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Wakayama Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771350/
• 关键词: 黄体化ホルモン(LH); ヒト卵胞液; 黄体化ホルモン結合抑制因子; LH受容体; 非ステロイド性卵巣内機能調節因子; ゴナドトロピン結合抑制因子

体外受精・胚移植施行症例より得た卵胞液を用いて、ヒト卵胞液中の黄体化ホルモン結合抑制因子(luteinizing hormone binding inhibitor : LHBI)について検討した。ヒト卵胞液を10.000rpmで遠沈し残渣を除いた後、残留分子量500および10.000のフィルターを用いて限外濾過、脱塩した。得られたヒト卵胞液低分子量分画(MW 500-10.000)を酢酸アンモニウムをelusion bufferとしてMono Qカラムによる陰イオン交換し画分化した。画分化されたサンプルについて、^<125>I-hLHのヒトLH受容体結合に対する効果をRadio ligand receptor assay (RRA)にて比較検討すると、Mono Qカラム非吸着分画(MQ-TO)に^<125>I-hLHの受容体結合を阻害する活性(LHBI活性)が回収された。以下、MQ-TO分画の生物活性について検討した。RRA法での検討では、MQ-TOは^<125>I-hLHのヒトLH受容体分画に対する結合を用量依存的に阻害した。ヒトLH受容体分画は95%O_2, 5%CO_2環境下で37C, 18hr培養するとhLH刺激により用量依存的にcAMPを産生したが、MQ-TOを同時添加するとhLH刺激下のcAMP産生は有意に抑制された。また、成熟マウス精巣間質細胞を用いたin vitro bioassayではovineLH刺激下に95%O_2, 5%CO_2環境下で34C, 3hr培養すると成熟マウス精巣間質細胞は用量依存的にcAMP, testosteroneを産生したが、MQ-TO同時添加によりovineLH刺激下のcAMP, testosterone産生は有意に抑制された。以上より、ヒト卵胞液中にLHBI活性分画が存在し、LHの受容体結合を調節し、LHにより誘導されるステロイド産生を修飾することで生物活性を発現している可能性が示唆された。

使用从接受体外受精和胚胎转移病例获得的卵泡液，我们研究了人卵泡液中的黄体生成激素结合抑制剂（LHBI）。将人卵泡液以10.000 rpm离心以去除残基，然后使用残留分子量为500和10.000的过滤器进行超过滤和脱盐。通过使用Mono Q列，使用乙酸铵作为弹性缓冲液，通过阴离子交换将人卵泡流体（MW 500-10.000）的低分子量分数（MW 500-10.000）分馏。 In the fractionated samples, the effect of ^<125>I-hLH on human LH receptor binding was compared with the Radio ligand receptor assay (RRA), and activity that inhibited the receptor binding of ^<125>I-hLH (LHBI activity) was recovered in the Mono Q column non-adsorbed fraction (MQ-TO).下面研究了MQ-TO分数的生物学活性。在RRA研究中，MQ-TO抑制了 ^<125> I-HLH与人LH受体分数的结合，以剂量依赖性方式。当在95％O_2和5％CO_2环境中培养37C和18小时的HLH刺激时，人类LH受体分数以剂量依赖性方式产生cAMP，但是当同时添加MQ-TO时，HLH刺激下的cAMP生产得到了显着抑制。此外，在使用成熟的小鼠睾丸基质细胞的生物测定中，当在Ovinelh刺激下培养34C和3hr在Ovinelh刺激下培养时，成熟的小鼠睾丸基质细胞以剂量依赖性的方式产生营地和睾丸激素，但同时添加了MQ至MQ-to MQ-to Pressional抑制了camp和Testeptulation stroumpulation stroumpulation stroute stroute刺激刺激。从以上，建议人卵泡液中存在LHBI活性部分，并且可以通过调节LH受体结合并修饰LH诱导的类固醇产生来表达生物学活性。