肺癌におけるEGFR-TKI耐性とRorシグナル系との関連についての探索研究

肺癌EGFR-TKI耐药与Ror信号系统关系的探索性研究

• 批准号: 25930002
• 负责人: 藤井 昌学
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-25930002/
• 关键词: Wnt5a-Rorシグナル; HGF-Metシグナル; EGFR-TKI耐性

上皮成長因子受容体(EGFR)遺伝子に活性型変異を有する肺腺癌に対して、EGFRチロシンキナーゼ阻害剤(EGFR-TKI)が奏効する。しかし、奏効した症例もほぼ例外なく耐性を獲得することから、EGFR-TKIに対する耐性機構の解明が臨床的に重要な課題となっている。耐性機構の1つには、癌細胞自身や間質の線維芽細胞等が産生する肝細胞増殖因子(HGF)によるHGF-Metシグナル経路の活性化が関わっていることが知られている。またRorファミリーは細胞外領域にクリングルドメインを有する唯一の受容体型チロシンキナーゼであるが、我々(神戸大学大学院医学研究科細胞生理学分野)は諸種の癌におけるWnt5a-Rorを介するシグナルの恒常的活性化が癌の増悪過程と密接に関係することを見出している。さらに最近、Metの増幅が認められる肺腺癌や胃癌の細胞において、Ror1がMetによりリン酸化されることで細胞増殖に関与することが報告された。本研究では、EGFR遺伝子変異を持つ代表的な培養肺腺癌細胞(HCC827, PC9等)を用いて、HGF-Metシグナルと(Wnt5a-) Ror1シグナルの相互作用による細胞増殖の制御機構とEGFR-TKI耐性化におけるそれらの役割を明らかにすることを目的とした。まず、siRNAによりRor1の発現を抑制した細胞株において、コントロール群と比較し、HGF・EGFR-TKI曝露下でこれらのシグナル伝達系が受ける影響や細胞の振る舞い(増殖率、細胞死)が受ける影響を生化学的・分子細胞生物学的手法により解析を行った。Ror1の発現の抑制にて、上記細胞株での細胞増殖は抑制されることは明らかとなった。次にその代表的な下流シグナルの解析を行ったが、増殖や生存に関与するシグナル(PI3K/Akt経路等)には影響がみられなかった。したがって、細胞増殖に関わるシグナル系やメカニズムをさらに探索してゆく予定である。

EGFR酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）对表皮生长因子受体（EGFR）基因中活性突变的肺腺癌有效。但是，由于响应的病例几乎总是抵抗力，因此阐明对EGFR-TKI的抵抗机制是临床上重要的问题。 It is known that one of the resistance mechanisms involves the activation of the HGF-Met signaling pathway by hepatocyte growth factor (HGF) produced by cancer cells themselves, stromal fibroblasts, etc. Furthermore, although the Ror family is the only receptor-type tyrosine kinase with a kringle domain in the extracellular region, we (Kobe University Graduate School of Medicine) have found that constitutive在各种癌症中，Wnt5a-Ror介导的信号的激活与癌症加剧过程密切相关。最近还报道说，ROR1参与了Met在肺腺癌和胃癌细胞中通过MET磷酸化参与细胞增殖的，观察到MET扩增。在这项研究中，我们旨在通过HGF-MET信号与（Wnt5a-）ROR1信号之间的相互作用来阐明细胞增殖调节的机制，并使用代表性培养的肺腺癌细胞（HCC827，PC9等）使用代表性培养的肺腺癌细胞中的EGFR-TKI抗性作用。首先，使用生化和分子细胞生物学方法分析了这些信号系统在HGF和EGFR-TKI暴露和细胞行为（增殖率，细胞死亡）下抑制ROR1表达的细胞系。据揭示，抑制ROR1表达会抑制上述细胞系中的细胞增殖。接下来，我们分析了典型的下游信号，但是对与增殖或生存有关的信号（例如PI3K/AKT途径）没有观察到任何影响。因此，我们计划进一步探索与细胞增殖有关的信号系统和机制。