着床前診断における、簡便で安価なバイオプシー技術の開発

开发用于植入前诊断的简单且廉价的活检技术

• 批准号: 17H00623
• 负责人: 児島 輝仁
• 金额: $ 0.33万
• 依托单位: Hyogo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17H00623/
• 关键词: 体外受精; 胚盤胞; 遺伝病

研究目的 : 近年、重篤な遺伝性疾患の伝播を回避するため、着床前診断(Preimplantation Genetic Diagnosis : PGD)が実施されるようになった。主にレーザーを用いて、胚盤胞期胚の将来胎盤となる栄養外胚細胞(trophectoderm : TE)を採取することにより行われる。しかし、レーザーは高価である上、発熱による胚へのダメージの可能性も否定できない。そこで本研究では安全で簡便に行えるバイオプシー法を開発することを目的とした。研究方法 : 実験に用いる胚盤胞期胚は、7週齢雌マウス(BDF1)に過剰排卵処理を行い、10-15週齢の成熟雄マウス(ICR)と体外受精後、4日間培養することにより作成した。以下の3種の方法でバイオプシーを行った。A)胚盤胞腔液(blastocoel fluid : BF)をマイクロマニブレーターに取り付けたピペットにより吸引する。B)孵化のため透明帯から部分的に脱出したTEの一部分を20μmピペットで吸引し、ホールディングピペットとの物理的擦過により分離する。C)透明帯から部分的に脱出したTE部分をマイクロブレードで切断する。以上の方法で採取したサンブルを用いて、PCRによる胚の性判別を実施した。各実験群におけるサンブル回収率、性別判定成功率、翌日の胚の生存率を算出した。研究成果 : A法によるサンブル回収率は75.0%(6/8)、性別判定成功率は33.3%(2/6)、胚の生存率は100%(8/8)であった。B法によるサンプル回収率は50.0%(5/10)、性別判定成功率は20.0%(1/5)、胚の生存率は90.0%(9/10)であった。C法では、サンプル回収率は81.25%(13/16)、性別判定成功率は84.62%(11/13)、胚の生存率は81.25%(13/16)であった。A法では胚の生存率は高かったが、性別判定成功率は低かった。B法ではサンブル回収率と性別判定成功率がともに低かった。C法はサンブル回収率、性別判定成功率、胚の生存率いずれも80%以上で性別判定成功率はA法、B法と比較し有意に高率であった(p<0.05)。以上の結果より、今後C法に改善を加えヒトヘの応用を目指したいと考えている。

研究目的：近年来，为了避免严重遗传性疾病的传播，已实施植入前遗传学诊断（PGD）。主要是利用激光收集滋养外胚层（TE），它将成为囊胚期胚胎的未来胎盘。然而，激光价格昂贵，并且不排除因热量而损坏胚胎的可能性。因此，本研究的目的是开发一种安全且易于执行的活检方法。研究方法：实验所用的囊胚期胚胎是对7周龄雌性小鼠（BDF1）进行超排卵处理，与10-15周龄成年雄性小鼠体外受精后培养4天获得的。创建者：使用以下三种方法进行活组织检查。 A) 用连接到显微操作器的移液器吸出囊胚液 (BF)。 B) 用 20 μm 移液器吸出因孵化而部分脱离透明带的 TE 部分，并用固定移液器物理刮擦分离。 C) 用微刀片切割部分脱离透明带的 TE 部分。使用通过上述方法收集的样品，通过PCR进行胚胎的性别确定。计算各实验组的样本回收率、性别判定成功率和次日胚胎存活率。研究结果：A法样品回收率为75.0%（6/8），性别判定成功率为33.3%（2/6），胚胎存活率为100%（8/8）。 B法样品回收率为50.0%（5/10），性别鉴定成功率为20.0%（1/5），胚胎存活率为90.0%（9/10）。采用C方法，样品回收率为81.25%（13/16），性别判定成功率为84.62%（11/13），胚胎存活率为81.25%（13/16）。方法A的胚胎存活率较高，但性别判定成功率较低。 B法样本采集率低，性别判定成功率低。 C方法的样品回收率、性别判定成功率、胚胎存活率均在80%以上，性别判定成功率显着高于A、B方法（p<0.05）。基于以上结果，我们希望在未来改进C方法，并致力于将其应用于人类。