宿主免疫機能抑制活性を有するクリイロコイタマダニ唾液腺成分の性状についての研究

具有宿主免疫功能抑制活性的硬蜱唾液腺成分的特性研究

基本信息

批准号：
10760179
负责人：
猪熊壽
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、クリイロコイタマダニ(以下Rs)の唾液腺抽出物(以下SGE)のうち、本来の宿主である犬末梢血リンパ球(PBL)機能を抑制する成分の性質を明らかにするとともに、免疫グロブリン産生機能をin vitroで抑制する成分を特定するための系を確立し、さらにSGEが免疫グロブリン産生能に及ぼす効果を観察した。まず、Rs-SGEが犬PBLの3種類のマイトゲン(ConA,PHA,PWM)に対する反応性に及ぼす効果を調べたところ、全てのマイトゲンで濃度依存性に抑制がみられた。また、これらの抑制はあらかじめRs-SGEをタンパク分解酵素(トリプシン)処理、熱処理(56度以上)、または犬抗Rs-IgGで処理することにより、その抑制活性を消失した。これらのことより、犬PBLを抑制するRs-SGEの主要な成分はタンパク質であること、また特にT細胞の活性を抑制することが考えられた。次に、犬PBLの免疫グロブリン産生機能を測定するために、ELISA系を確立した。抗犬IgG,MまたはAを用いたサンドイッチ法により、PBLをLPSまたはPWMで刺激培養したの上清中の各免疫グロブリンを1ngのオーダーで測定可能であった。これらの免疫グロブリンはRs-SGEを添加することによりほぼ濃度依存性にその産生が抑制された。これらのことより、SGEが犬のB細胞への直接作用またはT細胞依存性に免疫グロブリン産生を抑制した可能性が考えられた。

今年，我们将阐明棕腹硬蜱唾液腺提取物（以下简称SGE）中抑制犬外周血淋巴细胞（PBL）功能的成分的特性。我们还建立了体外鉴定抑制免疫球蛋白产生的成分的系统，并进一步观察了SGE对免疫球蛋白产生的影响。首先，我们研究了 Rs-SGE 对犬 PBL 对三种类型有丝分裂原（ConA、PHA 和 PWM）反应性的影响，发现所有有丝分裂原均以浓度依赖性方式受到抑制。此外，通过用蛋白水解酶（胰蛋白酶）预处理Rs-SGE、热处理（56度或更高）或用狗抗Rs-IgG处理，这些抑制活性被消除。这些结果表明，抑制犬PBL的Rs-SGE的主要成分是蛋白质，并且它特异性地抑制T细胞活性。接下来，我们建立了ELISA系统来测量犬PBL的免疫球蛋白产生功能。通过使用抗狗IgG、M或A的夹心法，可以对用LPS或PWM刺激的PBL上清液中的每种免疫球蛋白进行1ng量级的测定。通过添加 Rs-SGE，这些免疫球蛋白的产生以几乎浓度依赖性的方式受到抑制。这些发现表明，SGE 可能直接在 B 细胞上或以 T 细胞依赖性方式抑制免疫球蛋白的产生。