sLe^×糖鎖発現α_1-アシッドグリコプロテインの急性呼吸不全における役割

sLe^×聚糖表达的α_1-酸性糖蛋白在急性呼吸衰竭中的作用

基本信息

批准号：
09771184
负责人：
新藤光郎
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

1年目に確立したα 1-acid glycoprotein(以下AGP)の精製方法を用いて、標準AGPおよび健常人、患者血漿を精製したところ、精製のためのHPLCにおいて、ある程度糖鎖が分離でき、この段階でいくつかの糖鎖変化が推測できることがわかった。呼吸不全患者の血漿を精製すると15minのピークの前に別のピークが現れ、健常人と異なることが明らかとなった。(このピークの糖鎖構造について調べてみると、2本鎖が多いことが明らかとなった。)ヒドラジン分解による糖鎖の切り出し、ABOE化、逆相カラムを用いたHPLCによる糖鎖構造解析を行ったが、シアル酸とフコースを持つシアリルルイスx糖鎖を直接逆相カラムで解析することができないので、まず、シアリダーゼによりシアル酸を除去してから逆相カラムにかけて分枝鎖の数によりわけて、比較したところ、呼吸不全の患者では2本鎖が非常にふえていることがわかった。その時間的変化について,今後進めていく予定である。シアリルルイスx糖鎖は、セロトニンカラムを用いてまずシアル酸の数で分け、各々についてさらに逆相カラムで分けたものを、フコシダーゼでフコースをはずしたものと比較してそのピークを推定したところ、呼吸不全の患者においては、その比率が健常人に比し増加していた。今回、精製時の緩衝液、HPLC移動相のpHの安定性、ハイドロキシアパタイトカラムの再現性および耐久性、脱塩、濃縮装置の不備などの問題点により計画通り研究が進まなかったが、、引き続きAGP糖鎖の炎症における役割(好中球接着因子に対する効果)を明らかにする研究へと発展させていく予定である。

利用第一年建立的α1-酸性糖蛋白（以下简称AGP）纯化方法，对来自健康个体和患者的标准AGP和血浆进行纯化，发现可以预测不同阶段糖链的一些变化。当纯化呼吸衰竭患者的血浆时，在15分钟的峰之前出现了另一个峰，这表明该血浆与健康个体的血浆不同。（当我们研究这个峰的糖链结构时，发现有很多双链。）我们通过肼分解切断糖链，将其转化为ABOE，并使用HPLC分析糖链结构。然而，唾液酸与唾液酸和岩藻糖。由于不可能使用反相柱直接分析isx-聚糖，因此我们首先使用唾液酸酶去除唾液酸，然后使用反相柱根据支链的数量分离它们。双链显着增加。我们计划将来继续调查这些时间变化。与健康受试者相比，唾液酸不足的患者中该比例有所增加。这次，由于纯化过程中的缓冲液、HPLC流动相的pH稳定性、羟基磷灰石柱的重现性和耐用性以及脱盐和浓缩设备的缺陷等问题，研究没有按计划进行。开展这项研究以阐明 AGP 糖链在炎症中的作用（对中性粒细胞粘附因子的影响）。