脳内タンパク質のリン酸化に着目した、加齢で睡眠の質が低下する機序の解明

阐明睡眠质量随年龄增长而恶化的机制，重点关注大脑中蛋白质的磷酸化

• 批准号: 22K17848
• 负责人: 辻 将吾
• 金额: $ 3万
• 依托单位: National Center for Geriatrics and Gerontology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K17848/
• 关键词: 老化; 脳; 睡眠; リン酸化修飾; タンパク質

睡眠不足時にリン酸化されるタンパク質のうち、老化によってそのリン酸化が抑制されるものを探索した。若齢および老齢のマウスを明暗 12 時間交代のサイクルで飼育した。マウスが睡眠をとる明期の始まりを起点とし、6時間の断眠を施した群、及び自由に6時間睡眠をとらせた群、それぞれの脳から、視床下部、視床、海馬、小脳、大脳皮質を個別に回収した。まず、これまでの研究から、睡眠と老化の両方の制御に関与することが示唆されている視床下部に着目して解析を行った。回収した視床下部から全タンパク質を抽出し、これを等電点電気泳動とSDS-PAGEによる二次元電気泳動で展開し、タンパク質スポットをリン酸化タンパク質を特異的に染色する蛍光染色により検出した。各群での結果を比較したところ、睡眠状態に依存して量が変化するスポットが多数検出された。また、その変化が老齢マウスでは失われるスポットも複数存在した。現在、このスポット中に含まれるタンパク質を質量分析により同定することを試みている。

在睡眠剥夺期间磷酸化的蛋白质中，我们寻找磷酸化因衰老而受到抑制的蛋白质。年轻和年老的小鼠被饲养在 12 小时的光/暗周期中。下丘脑、丘脑、海马体、小脑和大脑分别从剥夺 6 小时睡眠组和从皮质睡眠的光照期开始随意睡眠 6 小时的组的大脑中提取。被单独收集。首先，我们将分析重点放在下丘脑上，根据之前的研究，下丘脑被认为参与睡眠和衰老的控制。从收集的下丘脑中提取总蛋白，使用 SDS-PAGE 通过等电聚焦和二维电泳显色，并通过荧光染色检测蛋白点，该荧光染色特异性地染色磷酸化蛋白。当比较各组的结果时，发现了许多斑点，其数量根据睡眠状态而变化。此外，在老年小鼠中，有多个部位的这种变化消失了。我们目前正在尝试使用质谱法来鉴定该点中包含的蛋白质。