糖尿病ラットにおけるLPS歯肉溝滴下歯周炎モデルの作製と補体の発症・進行への関与

糖尿病大鼠LPS龈沟滴注牙周炎模型的建立及补体在发病和进展中的作用

基本信息

批准号：
22K17043
负责人：
山下恭徳
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、『糖尿病自然発症モデルにおいてLPS歯肉溝滴下歯周炎モデルの病態、歯周炎発症後に糖尿病の病態は悪化するのか』を検討している。【実験 LPS歯肉溝滴下歯周炎モデルにおいて糖尿病発症が歯周病に及ぼす影響】Wistar系ラット雄(WT, 9週齢)と、Wistar fattyラット雄(9週齢)に麻酔下で上顎右側第一臼歯口蓋側歯肉溝にマイクロピペットを用いてA a Y4由来LPS (50 μg/μl)を懸濁したPBS を滴下投与する。LPS懸濁液合計18 μl(3 μl×6 回)を１日あたり30 分間滴下し、各滴下の間隔は５分間とする。コントロール(WT)群には同様の方法でPBSを歯肉溝に滴下する。5日目および10日目にマイクロCT撮影を行い、歯槽骨吸収量を測定する。10 回目の滴下の1時間後に屠殺する。LPSの歯肉溝滴下のみで糖尿病ラットに歯周炎モデルが作製できない場合には、従来の方法通り、LPS歯肉溝滴下開始前にLPS感作を行う。Complete Freund’s adjuvant で乳化したA.actinomycetemcomitans LPS 150 μg 含有PBS 0.3 mlを腹腔内投与し、さらに28日後にIncomplete Freund’s adjuvant で乳化したLPS 150 μgを含有PBS 0.3 mlを腹腔内投与する。屠殺直後に右側上顎骨を摘出し、4%パラホルムアルデヒドを含むリン酸緩衝液(pH7.4)にて4 °Cで10 時間固定する。10%EDTA-2Na(pH7.4) にて4 °Cで3 週間脱灰したのち、AMeX 法にてパラフィン包埋し、上顎右側第一臼歯の頬舌的な連続切片(厚さ4 μm)を作製する。現在、病理組織学的観察のため、切片をヘマトキシリン・エオジン染色(H.E.染色)し、組織学的計測を行っている段階である。

在这项研究中，我们正在考虑“在糖尿病的自然发作和牙周炎症后的糖尿病状况恶化的情况下，LPS牙龈浸泡模型的可悲状况是可悲的吗？” [实验性LPS牙龈脱瘤型毒素意图对糖尿病对牙周疾病的糖尿病作用]基于Wistar的大鼠雄性（WT，9周）和Wistar Fatty Rat雄性（9周）1。丢弃悬挂A -AY4衍生的LPS的PBS （50μg/μl）使用针灸侧齿条中的微孔悬浮在PBS中。每天总共滴30分钟30分钟，滴水之间的间隔为5分钟，持续5分钟。在控件（WT）组中，PBS以相同的方式掉入口香糖沟中。在第5天和第10天进行微CT射击，以测量肺泡吸收。第十滴一小时后屠杀。如果仅在LPS牙龈液滴下才能在糖尿病大鼠中产生牙周炎模型，则在LPS Gingiva液滴开始之前将进行LPS感觉。完整的Freund的A. actinomycetemcomitans LPS150μg含有PBS 0.3 mL的腹腔腔dlecty delect PBS 0.3 mL含有0μg。屠宰后立即将右上颌骨去除，并用含有4％多聚甲醛的磷酸缓冲液（PH7.4）在4°C固定10小时。 10％EDTA-2NA（PH7.4）在4°C下破坏灰分3周后，将石蜡包裹在Amex方法下，右上摩尔的鸡连续切割（厚度为4μm）（厚度为4μm）。制成。目前，正处于hematokyin -ejin染色（H.E.染色）进行病理组织观察进行插曲的阶段。