骨巨細胞腫における腫瘍細胞と免疫細胞の相互作用を対象とした新規薬物療法の開発

开发针对骨巨细胞瘤中肿瘤细胞与免疫细胞之间相互作用的新药物疗法

• 批准号: 22K16747
• 负责人: 高田 尚輝
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Osaka Metropolitan University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16747/
• 关键词: 骨巨細胞腫; 間葉系細胞; 破骨細胞様多核巨細胞; 腫瘍関連マクロファージ; 腫瘍微小環境; RNAシーケンス解析; 新規薬物療法

本研究の目的は局所破壊性を有し、高い再発率と稀に肺転移や悪性転化を示す良悪性中間型の骨腫瘍である骨巨細胞腫の腫瘍周囲環境を検討し、新規薬物療法の可能性を探索することである。そこで、まず骨巨細胞腫の病理を確認するため、組織切片の染色を行った。骨巨細胞腫は破骨細胞様の多核巨細胞と腫瘍細胞と思われる紡錘形の細胞で構成された。更に免疫染色を行って腫瘍微小環境としてのマクロファージ等を探索した。また骨巨細胞腫手術検体より、コラゲナーゼとデオキシリボヌクレアーゼ、ヒアルロニダーゼを用いて細胞解離を行って、腫瘍細胞を単離し、細胞培養を試みた。腫瘍細胞は単離可能で、十分な増殖能があることを確認した。更に腫瘍細胞の特徴を検討するために。RNA抽出を行い、幹細胞マーカーやがん抑制遺伝子などの発現を質的リアルタイムPCR法で検討した。幹細胞の特徴としてはがん抑制遺伝子などの目立った増幅は認められなかった。　治療薬としての候補としてmTOR阻害薬を投与し、細胞増殖をスクラッチアッセイやMTTアッセイなどで確認したが、有意な幹細胞の増殖抑制効果は得られなかった。今年度の実験において検体数が少ないことは課題であるものの組織評価、in vitroでの細胞単離・培養、また阻害薬等投与による腫瘍細胞などの抑制効果などを確認する実験手法は確立されたと考えられ、今後はより詳細な構成細胞の性質・腫瘍美食環境について検討を行っていく予定である。

这项研究的目的是研究骨骼巨细胞肿瘤的周围肿瘤环境，一种具有局部破坏性特性和高复发率的良性中间型骨肿瘤，很少表现出肺转移和恶性转化，并探索了新型药物治疗的可能性。因此，首先将组织切片染色以确认骨巨细胞肿瘤的病理。巨型骨细胞肿瘤由破骨细胞状的多核细胞和纺锤形细胞组成，这些细胞似乎是肿瘤细胞。此外，进行免疫染色以寻找巨噬细胞和其他肿瘤微环境。此外，使用胶原酶，脱氧核糖核酸酶和透明质酸酶从骨巨细胞肿瘤的手术标本中解离细胞，并分离肿瘤细胞并尝试细胞培养。肿瘤细胞被证实是分离的，并且具有足够的增殖潜力。进一步检查肿瘤细胞的特征。提取RNA并使用定性实时PCR方法研究干细胞标记物，并检查癌症基因。干细胞没有任何明显的癌症抑制基因或其他物质的明显扩增的特征。将MTOR抑制剂作为治疗药物的候选者施用，并使用刮擦分析和MTT分析确认细胞增殖，但对干细胞生长没有显着影响。尽管今年实验中的标本数量少数是一个挑战，但人们认为已经建立了实验方法来确认组织评估，细胞分离和体外培养，以及抑制剂等施用抑制作用等，以及我们将来我们计划研究组成细胞和肿瘤食品环境的更详细的特征。