機能強化した脂肪由来幹細胞を用いた新たな骨折治癒促進治療の開発

使用功能增强的脂肪干细胞开发促进骨折愈合的新疗法

基本信息

批准号：
22K16737
负责人：
野村一世
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16737/
关键词：
メチルグリオキサール Glo1 ADSCs 糖尿病骨折治癒遷延老化

项目摘要

メチルグリオキサール（MG）反応性蛍光センサープローブによるin vitroでの糖化ストレス反応動態を評価した。脂肪由来幹細胞での評価の前にsiRNAの導入の評価およびコントロールとして扱いやすいマウス頭蓋冠由来骨芽細胞(MC3T#)にてMG消去酵素であるGLO1 siRNAをトランスフェクションすることによりGlo1をノックダウンし、MG産生能の増減を評価した。si RNAの導入には市販の試薬を用いたリポフェクション法を用い、RT-PCRにてGlo1の発現が有意に抑制されており、その導入の確認に成功した。さらにGlo1 siRNAの導入によりMGは骨芽細胞内で増加することを確認した。フローサイトメトリーによる生存細胞数の評価もおこなったが、現時点ではノックダウンによる細胞数の減少は認められなかった。ストレプトゾトシンをマウスに投与し長期経過した糖尿病骨粗鬆症モデルマウスの作成を行ない、その脛骨のPCRも施行しGlo1の発現を評価したが、コントロールマウスと比較し有意な増減は確認できなかった。体重も著明に異なっておりコントロールとして適切でない可能性が存在したため、コントロールにMG消去薬を使用した評価方法への変更をおこなっている。骨粗鬆症また、糖尿病マウスの作成および、そこからの脂肪組織を採取し、ADSCsの作成を行ない、ADSCsへのGlo1のトランスフェクションの施行およびMG産生の評価を進行している。

我们使用甲基乙二醛（MG）反应性荧光传感器探针在体外评估了糖化应激反应动力学。在对脂肪干细胞进行评估之前，我们通过在小鼠颅骨来源的成骨细胞（MC3T#）中转染 GLO1 siRNA（一种 MG 擦除酶）来敲低 Glo1，该细胞易于用于评估 siRNA 的引入和控制。评价MG产生能力的增加或减少。采用使用市售试剂的脂转染法导入si RNA，RT-PCR显示Glo1的表达被显着抑制，成功确认了导入。此外，我们通过引入 Glo1 siRNA 证实了成骨细胞中 MG 的增加。还通过流式细胞术评估了活细胞数，但此时没有观察到由于敲低而导致的细胞数减少。我们通过给小鼠注射链脲佐菌素来创建长期糖尿病骨质疏松模型小鼠，并对其胫骨进行 PCR 评估 Glo1 表达，但与对照小鼠相比，没有观察到明显的增加或减少。由于体重显着不同，并且有可能不适合作为对照，因此我们改变评价方法，使用MG消除药物作为对照。骨质疏松症我们还创建糖尿病小鼠，收集它们的脂肪组织，创建 ADSC，用 Glo1 转染 ADSC，并评估 MG 的产生。