Analysis on the function of prostacyclin synthase expressed in macrophages in inflammatory diseases

巨噬细胞表达的前列环素合酶在炎症性疾病中的功能分析

基本信息

批准号：
22K15283
负责人：
落合翔
金额：
$ 3万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

2022年度は、主にマクロファージ (Mf) におけるPGISの機能について解析した。まずMf分化時におけるPGISの機能について、骨髄由来Mf (BMDM) を用い検討した。野生型およびPGIS遺伝子欠損マウスから骨髄細胞を採取し、M-CSF添加によりM0細胞を作成した。さらにM0細胞をLPS +IFNγ添加によりM1細胞に、IL-4添加によりM2細胞に分化させた。リアルタイムPCR 法によりM1マーカーであるiNOS、M2マーカーであるYm-1の遺伝子発現を解析したところ、これらM1, M2マーカーの発現量にPGIS欠損による影響は見られなかった。このことから、PGISのM1, M2分化への影響は軽微であると考えられた。次にプロスタグランジン (PG) 産生酵素の発現量を検討したところ、M1細胞ではM0, M2細胞と比較し、COX-2やmPGES-1の遺伝子発現の増加が見られた。一方、M2細胞においてはPGISやCOX-1の遺伝子発現がM0, M1細胞と比較して増加していた。これらの細胞におけるPG産生をLC-MS/MSを用いて解析したところ、M0, M1, M2細胞いずれにおいても、PGE2が最も多く検出されたが、PGI2の安定代謝物である6-keto-PGF1aは最も産生量が少なかった。次に、細胞の起源によりPG産生能が異なると考え、マウス腹腔内細胞から腹腔内Mfを調製し検討に用いた。腹腔内MfでのPG産生量について検討したところ、BMDMと異なり6-keto-PGF1aが最も多く検出された。腹腔内MfにM1分化に必要なLPS +IFNγ刺激、M2分化に必要なIL-4刺激を行ったところ、M2細胞においてPGISの遺伝子発現が増加した。以上のことから、PGISはM1細胞と比較しM2細胞において多く発現し、M2細胞はM1細胞よりもPGI2産生能が高いことが考えられた。

在2022财年，我们分析了PGI的功能，主要是巨噬细胞（MF）。首先，我们使用骨髓衍生的MF（BMDM）研究了MF分化过程中PGI的功能。从野生型和缺乏PGI的小鼠中收集骨髓细胞，并通过添加M-CSF产生M0细胞。此外，通过LPS +IFNγ和IL-4将M0细胞分化为M1细胞。当通过实时PCR分析M1标记INOS和M2标记YM-1的基因表达时，未发现PGIS缺乏对这些M1和M2标记的表达水平的影响。这表明PGI对M1和M2分化的影响很小。接下来，当我们检查前列腺素（PG）产生酶的表达水平时，与M0和M2细胞相比，M1细胞中COX-2和MPGES-1的基因表达增加。另一方面，与M0和M1细胞相比，M2细胞中的PGI和COX-1基因表达增加。当使用LC-MS/MS分析这些细胞中的PG产生时，在M0，M1和M2细胞中检测到PGE2最多的PGE2，但是PGI2的稳定代谢物的6-Keto-PGF1A产生了最低量。接下来，根据细胞的起源，产生PG产生的能力不同，腹膜内MF是从小鼠腹膜内细胞制备的，并用于研究。当我们研究腹膜内MF中的PG产生量时，与BMDM不同，最多检测到6-Keto-PGF1A。当用LPS +IFNγ刺激腹膜内MF（M1分化是M2分化所必需的必要的，这是M2分化所必需的，M2细胞中PGI的基因表达增加。从上面，人们认为PGI在M2细胞中的表达比M1细胞中的表达更多，并且M2细胞的PGI2生产能力比M1细胞更高。