精巣内分泌機能の改善・再構築に向けた基礎および臨床的検討

改善和重建睾丸内分泌功能的基础和临床研究

• 批准号: 21K16740
• 负责人: 富田 圭司
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Shiga University of Medical Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16740/
• 关键词: 精巣内分泌機能; ライディッヒ細胞; テストステロン; 精巣; 内分泌

In vitro精子形成モデルにおいてD型アスパラギン酸を培地に添加することにより、精巣組織内での精子幹細胞分裂が阻害することがわかった。一方精巣組織中にはD型アスパラギン酸が存在することが確認され、その局在は精子細胞の細胞質であることがわかった。さらに成熟し遊離した精子にはD型アスパラギン酸は含まれず、精子成熟に伴い精子細胞の細胞質に含まれる形でセルトリ細胞へ放出されることが想定された。これによりD型アスパラギン酸はセルトリ細胞からさらに間質へ放出されることでライディッヒ細胞に作用し、in vivoでもテストステロン合成を促進するという仮説を立てた。Percoll濃度勾配法によりマウス精巣よりライディッヒ細胞を高いpurification rateで遊離し、これを培養することに成功した。次にこの培養系において、その培地へD型アスパラギン酸を添加することで、添加していないコントロール群と比較し培地中へのテストステロン合成が促進される可能性が示唆された。また購入可能なライディッヒ細胞株の初代培養においても、同様にD型アスパラギン酸によるライディッヒ細胞のテストステロン合成の可能性が確認できた。さらにIn vitro精子形成モデル(Ex vivoモデル)の培地にD型アスパラギン酸を添加し、精巣組織そのものから培地中へのテストステロン分泌を観察したが、培養後の培地中テストステロン濃度を測定したところ、コントロール群と比較しテストステロン濃度の上昇は確認できなかった。

在体外精子发生模型中，发现在培养基中添加D型天冬氨酸可抑制睾丸组织内的精子干细胞分裂。另一方面，证实了睾丸组织中存在D型天冬氨酸，并且发现其定位于精子细胞的细胞质中。此外，成熟和释放的精子不含有D型天冬氨酸，并且推测当精子成熟时，D型天冬氨酸将被释放到精子细胞的细胞质中的支持细胞中。因此，我们推测D型天冬氨酸进一步从支持细胞释放到间质，作用于间质细胞，促进体内睾酮合成。我们使用 Percoll 浓度梯度法成功地从小鼠睾丸中高纯化率分离 Leydig 细胞并进行培养。接下来，在该培养系统中，表明与未添加的对照组相比，向培养基中添加D型天冬氨酸可以促进培养基中的睾酮合成。此外，在市售Leydig细胞系的原代培养中，类似地证实了使用D型天冬氨酸在Leydig细胞中合成睾酮的可能性。此外，我们在体外精子发生模型（Ex vivo model）的培养基中添加D型天冬氨酸，观察睾酮组织本身向培养基中分泌的睾酮浓度与对照组相比没有增加。