尿道下裂患者におけるMAMLD1変異解析とMAMLD1遺伝子機能の解明

尿道下裂患者 MAMLD1 突变分析及 MAMLD1 基因功能阐明

基本信息

批准号：
22791715
负责人：
中村美智子
金额：
$ 2.58万
依托单位：
National Research Institute for Child Health and Development
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22791715/
关键词：
遺伝子尿道下裂ライディッヒ細胞性分化疾患テストステロン

项目摘要

当研究室で以前より集積していた尿道下裂・性分化疾患(DSD)患者の検体に、本年度さらに39例を追加し、MAMLD1変異解析を行った。その結果、約200例の検体の中で、4例のナンセンス変異と1例のスプライシング部位変異を同定した。尿道下裂・XY DSD患者におけるMAMLD1変異の割合は、約2.5%であった。ナンセンス変異を有する3例では、乳児期から幼児期までの下垂体-性腺機能は概ね正常範囲で推移していたものの、学童期になって、その機能低下と精巣の微小石灰化が認められた。このことはMAMLD1が胎生期だけでなく、出生後の精巣機能にも影響を及ぼすことを示唆するものと考える。また、スプライシング部位変異におけるルシフェラーゼアッセイによる機能解析では、MAMLD1のHES3プロモーター領域に対する転写活性化能の低下は認められず、タンパク発現量の確認が必要であるものの、スプライシング部位の異常全てが、必ずしも機能の異常につながるわけではない可能性があることが分かった。マウスライディッヒ腫瘍細胞株を用いたsiRNAによるMamld1発現抑制実験では、Mamld1の発現を抑制すると、培養上清中の17ハイドロキシプレグネノロン・17ハイドロキシプロゲステロンからテストステロンまでのステロイド代謝産物濃度が有意に減少した。そして、テストステロン産生酵素のうち、Cyp17a1のmRNA発現量が有意に減少すること、これに一致して、17-hydroxylase活性が低下していることを見出した。また、同じ細胞の発現パターンをマイクロアレイで解析し、Cyp17a1の発現低下を再現した。以上のことから、MAMLD1/Mamld1は、精巣におけるCyp17a1の発現調節を介し、胎生期ばかりでなく、出生後のテストステロン産生にも関与することが示唆された。

今年，我们在实验室一段时间收集的尿道下裂和性发育障碍（DSD）患者标本的基础上，又增加了39份标本，并进行了MAMLD1突变分析。结果，在大约 200 个样本中，鉴定出了 4 个无义突变和 1 个剪接位点突变。尿道下裂/XY DSD 患者中 MAMLD1 突变的比例约为 2.5%。在三例无义突变的病例中，从婴儿期到幼儿期，垂体性腺功能通常保持在正常范围内，但在学龄期观察到功能下降和睾丸微钙化。这表明MAMLD1不仅影响胚胎期，还影响出生后睾丸功能。此外，使用荧光素酶检测剪接位点突变的功能分析并未显示MAMLD1激活HES3启动子区域转录的能力下降，虽然有必要确认蛋白表达水平，但并非所有剪接位点异常都发现这不一定会导致异常。在使用小鼠 Leydig 肿瘤细胞系进行 siRNA 介导的 Mamld1 表达抑制中，Mamld1 表达的抑制显着降低了培养物上清液中类固醇代谢物的浓度，从 17-羟基孕烯醇酮和 17-羟基孕酮到睾酮。在产生睾酮的酶中，他们发现Cyp17a1的mRNA表达水平显着降低，与此相一致，17-羟化酶活性也降低。他们还使用微阵列分析了相同细胞的表达模式，并重现了 Cyp17a1 表达降低的情况。由此表明，MAMLD1/Mamld1不仅参与胚胎期，而且通过调节睾丸中Cyp17a1的表达参与出生后睾酮的产生。