尿道下裂患者におけるMAMLD1変異解析とMAMLD1遺伝子機能の解明

尿道下裂患者 MAMLD1 突变分析及 MAMLD1 基因功能阐明

基本信息

批准号：
22791715
负责人：
中村美智子
金额：
$ 2.58万
依托单位：
National Research Institute for Child Health and Development
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22791715/
关键词：
遺伝子尿道下裂ライディッヒ細胞性分化疾患テストステロン

项目摘要

当研究室で以前より集積していた尿道下裂・性分化疾患(DSD)患者の検体に、本年度さらに39例を追加し、MAMLD1変異解析を行った。その結果、約200例の検体の中で、4例のナンセンス変異と1例のスプライシング部位変異を同定した。尿道下裂・XY DSD患者におけるMAMLD1変異の割合は、約2.5%であった。ナンセンス変異を有する3例では、乳児期から幼児期までの下垂体-性腺機能は概ね正常範囲で推移していたものの、学童期になって、その機能低下と精巣の微小石灰化が認められた。このことはMAMLD1が胎生期だけでなく、出生後の精巣機能にも影響を及ぼすことを示唆するものと考える。また、スプライシング部位変異におけるルシフェラーゼアッセイによる機能解析では、MAMLD1のHES3プロモーター領域に対する転写活性化能の低下は認められず、タンパク発現量の確認が必要であるものの、スプライシング部位の異常全てが、必ずしも機能の異常につながるわけではない可能性があることが分かった。マウスライディッヒ腫瘍細胞株を用いたsiRNAによるMamld1発現抑制実験では、Mamld1の発現を抑制すると、培養上清中の17ハイドロキシプレグネノロン・17ハイドロキシプロゲステロンからテストステロンまでのステロイド代謝産物濃度が有意に減少した。そして、テストステロン産生酵素のうち、Cyp17a1のmRNA発現量が有意に減少すること、これに一致して、17-hydroxylase活性が低下していることを見出した。また、同じ細胞の発現パターンをマイクロアレイで解析し、Cyp17a1の発現低下を再現した。以上のことから、MAMLD1/Mamld1は、精巣におけるCyp17a1の発現調節を介し、胎生期ばかりでなく、出生後のテストステロン産生にも関与することが示唆された。

今年另外39例添加到了先前在我们实验室中积累的催生和分化疾病（DSD）的样本，并进行了MAMLD1突变分析。结果，在大约200个标本中发现了四个废话突变和一个剪接位点突变。 Hypospadias和XY DSD患者的MAMLD1突变发生率约为2.5％。在三种无义突变的病例中，垂体腺 - 基诺功能通常在从婴儿期到婴儿期的正常范围内，但是在学龄前，其功能下降和睾丸微钙化。这表明MAMLD1不仅在胎儿时期还会影响睾丸功能，而且会影响产后。此外，使用荧光素酶测定进行剪接位点突变的功能分析表明，MAMLD1激活转录到HES3启动子区域的能力尚未降低，尽管有必要确认蛋白质表达水平，但发现拼接部位中的所有异常可能不一定会导致功能的异常。在使用siRNA使用小鼠Leidig肿瘤细胞系抑制MAMLD1表达的实验中，抑制MAMLD1表达可显着降低17个羟基替宁诺酮的类固醇代谢产物的浓度和17个羟化性苯甲甲苯和17羟基丙酮对睾丸激素的培养物中。然后发现，产生睾丸激素的酶中CYP17A1的mRNA表达水平显着降低，并且与此一致，17-羟化酶活性降低。此外，通过微阵列分析了同一细胞的表达模式，以重现CYP17A1表达的降低。从以上，建议MAMLD1/MAMLD1不仅在胎儿阶段涉及，而且还通过调节睾丸中的CYP17A1表达来参与产后睾丸激素的产生。