Development of therapeutic strategies for glioblastoma by simultaneously targeting tumor stem cells and differentiated tumor cells

同时靶向肿瘤干细胞和分化肿瘤细胞开发胶质母细胞瘤治疗策略

基本信息

批准号：
21K16632
负责人：
藤井謙太郎
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度までの決定した併用治療薬剤A(GSC target)と薬剤B(DGC target)をヒトグリオーマ由来細胞株に投与し、無治療、薬剤A、薬剤Bの単独投与、併用(薬剤A,薬剤B同時投与)の4群の細胞株を作成し、RNA-sequencingに提出、発現が変化した遺伝子と、それに伴い変動しているPathwayを解析した。その結果からPI3k-Akt-mTOR pathwayとCell cycleに関するpathwayが薬剤処理により抑制されることが確認され、これらの結果を細胞から抽出したproteinでWestern Blottingでも示した。In vitroにおいては上記に加え、単剤および薬剤併用による細胞周期の変化と、Apoptosisの増加を確認した。In vivo実験では、ヌードマウスにVitroで使用したものと同じ細胞株を移植後、無治療、薬剤A、薬剤Bの単独、および併用の4群に分けて治療を行った。治療後、脳組織を採取しH.E染色と免疫染色を実施し、治療が腫瘍組織に及ぼす影響を評価した。その結果、薬剤投与による腫瘍サイズの縮小、Cell Cycle停止に伴う増殖能の低下(KI-67陽性率の低下)、Apoptosis細胞の増加(Cleaved- Caspase3陽性細胞の増加)を認めた。またこれらの組織で認めた変化は単剤治療と比較して併用療法でより強化されていることを確認した。

将截至前一年确定的联合治疗药物 A（GSC 目标）和药物 B（DGC 目标）施用至人胶质瘤来源的细胞系中，创建四组细胞系（同时施用）并进行 RNA 测序。分析表达发生变化的基因以及相应变化的途径。结果证实，药物治疗可抑制 PI3k-Akt-mTOR 通路和细胞周期相关通路，并且使用从细胞中提取的蛋白质进行 Western Blotting 也证实了这些结果。在体外，除上述之外，单药和药物组合也证实了细胞周期的变化和细胞凋亡的增加。在体内实验中，裸鼠被移植与体外使用的相同细胞系，然后分为四组：不处理、药物A、单独药物B和组合。治疗后，收集脑组织并进行HE染色和免疫染色，以评价治疗对肿瘤组织的效果。结果，我们观察到由于给药而导致的肿瘤尺寸减小、由于细胞周期停止而导致增殖能力降低（KI-67阳性率降低）以及凋亡细胞增加（Cleaved-Caspase3阳性细胞增加）。我们还证实，联合治疗比单一治疗更能增强在这些组织中观察到的变化。