Molecular biological analysis of gastrointestinal neuroendocrine tumors and development of new therapeutic drugs

胃肠神经内分泌肿瘤的分子生物学分析及新治疗药物的开发

• 批准号: 22K08835
• 负责人: 進士 誠一
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Nippon Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08835/
• 关键词: 消化管神経内分泌腫瘍; がん幹細胞; 走査型電子顕微鏡; 位相差顕微鏡; EMT; 神経内分泌腫瘍; 消化管

消化管神経内分泌癌（NEC）は診断時に多くの症例で遠隔転移がみられる、極めて予後不良な疾患である。しかし、通常の消化器癌に有効な抗がん剤の効果も乏しく、治療法は未だ確立していない。申請者らはこれまで大腸神経内分泌由来の培養細胞株（SS-2細胞）の樹立に成功し、そのスフィアではがん幹細胞マーカーであるCD133が高発現していることを報告した。近年、膵・消化管神経内分泌腫瘍が注目され診断基準や治療法が整理されつつある中で、NECの罹患率が35年間で50倍に増加し、今後さらに増加し続けることが予想される。しかし、国内外を通してNECの悪性化の機構や転移能についての基礎的・臨床的研究は進んでいない。そこで申請者はNECに対する新規治療法の開発を目的に細胞表面に発現している糖鎖の役割や、糖鎖を標的とした薬剤開発、腫瘍微小環境についての検討を開始した。令和4年度は、通常のヒト大腸癌培養細胞株（DLD-1, CACO-2, HCT-15, SW480, COLO-302）とヒト大腸NEC培養細胞株（SS-2）におけるEMTマーカー（E-cadherin, Vimentin）発現、ならびにがん幹細胞マーカー（CD133）発現をRT-PCR法で検討した。その結果、腫瘍細胞は様々な程度にEMTマーカーを発現していた。SS-2細胞はE-cadherin高値の上皮系の性質を持つ細胞株であった。がん幹細胞マーカーについては、CACO-2が他の培養細胞株と比較して有意にCD133が高発現していた。今後、3D培養を行い、位相差顕微鏡、走査型電子顕微鏡で観察し形態的・機能的特徴の違いを検討する。さらに3D培養した細胞のEMTマーカー発現、ならびにがん幹細胞マーカー発現について検討する。

胃肠神经内分泌癌（NEC）是一种预后极差的疾病，许多病例在诊断时已出现远处转移。然而，对普通胃肠道癌症有效的抗癌药物效果较差，目前尚未建立治疗方法。申请人此前已成功建立了源自结肠神经内分泌细胞的培养细胞系（SS-2细胞），并报道了癌症干细胞标记物CD133在球体中高表达。近年来，胰腺和胃肠道神经内分泌肿瘤引起人们的关注，诊断标准和治疗方法正在细化，NEC的发病率在过去35年中增加了50倍，预计未来还将继续增加。然而，国内外关于NEC恶变及转移潜力的基础和临床研究尚未取得进展。因此，申请人开始研究细胞表面表达的糖链的作用、针对糖链的药物开发以及肿瘤微环境，旨在开发一种新的NEC治疗方法。在2020财年，我们将重点使用RT-PCR检查EMT标志物（E-钙粘蛋白、波形蛋白）和癌症干细胞标志物（CD133）的表达。结果显示肿瘤细胞不同程度表达EMT标志物。 SS-2细胞是具有上皮特征和高E-钙粘蛋白水平的细胞系。关于癌症干细胞标志物，CACO-2 的 CD133 表达显着高于其他培养细胞系。未来，我们将进行3D培养，并使用相差显微镜和扫描电子显微镜观察，以检查形态和功能特征的差异。此外，我们将检查 3D 培养细胞中的 EMT 标记表达和癌症干细胞标记表达。