Verification of therapeutic effects by amniotic fluid stem cell sheet for rat myelomeningocele model.

羊水干细胞片对大鼠脊髓脊膜膨出模型治疗效果的验证。

• 批准号: 21K16599
• 负责人: 山崎 和義
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16599/
• 关键词: 羊水幹細胞; 細胞シート; 脊髄髄膜瘤; 羊水幹細胞シート; 胎児期手術

ラット脊髄髄膜瘤モデルに対して、同種羊水幹細胞シート移植の治療効果の検証を目的として、羊水幹細胞シートの作成と移植手技を下記方法で確立した。妊娠14日のSDラットを、安楽死後に開腹して子宮内の胎仔周囲の羊水を吸引・採取し、遠心分離後に幹細胞培養を継続し、複数回継代が問題無く可能であることを確認した。継代後の幹細胞を、温度応答性の培養皿に播種してアスコルビン酸入りの培養液で培養継続すると、一定の確率で均一にコンフルエントになることが確認され、培養皿を常温環境に移すことで、細胞シートが剥離されることが実証できた。妊娠18日目のラットを安楽死後に、開腹して胎仔を摘出し、手術用顕微鏡を用いて胎仔の背中に幹細胞シートを破損することなく貼付し、10-0ナイロン糸で胎仔組織に縫合固定実験を行い、シートの移植が手技的に可能であることを確認した。さらに、妊娠18日目のラットを全身麻酔下に小開腹し、子宮を小切開後に胎仔の背中に幹細胞シートを貼付し、10-0ナイロン糸でシートを貼付・固定することで移植し、子宮を縫合後、母体は生存可能で、実験の手術手技が無理なく可能であることが確認できた。妊娠ラット手術後に十分な管理が可能な環境が整った段階で、妊娠ラットにレチノイン酸を経口投与して胎児脊髄髄膜瘤モデルが作成可能かを確認後、脊髄髄膜瘤モデルの幹細胞シート移植の本実験に移行し、移植後の組織評価と、出産が可能な場合は出生後の運動機能評価なども検討し、治療効果を確認する予定である。

为了验证同种异体羊水干细胞片移植对大鼠脊髓脊膜膨出模型的治疗效果，我们采用以下方法建立了羊水干细胞片的制备和移植流程。将怀孕14天的SD大鼠安乐死后，开腹吸出并收集子宫内胎儿周围的羊水，离心后继续干细胞培养，证实可以毫无问题地进行多次传代。 。已证实，如果将传代的干细胞接种在温度响应型培养皿中，并在含有抗坏血酸的培养液中继续培养，它们将以一定的概率均匀融合，并且可以将培养皿移至温度敏感的培养皿中。我们能够证明细胞片在室温环境下被剥离。妊娠第18天对大鼠实施安乐死后，通过剖腹手术取出胎儿，在不损伤胎儿的情况下，利用手术显微镜将干细胞片贴在胎儿背部，然后用缝合器将其缝合固定在胎儿组织上。 10-0尼龙线我们进行了实验，证实片材移植在技术上是可行的。此外，在怀孕第18天在全身麻醉下对大鼠进行腹部小切口，在子宫内切开小切口后将干细胞片贴在胎儿的背部，确认了母体的存在。缝合后可行，并且实验性外科手术可以毫无困难地进行。对怀孕大鼠进行手术后，当建立了允许充分管理的环境时，对怀孕大鼠口服视黄酸以确认是否可以创建胎儿脊髓脊膜膨出模型，然后将干细胞片移植到骨髓脊膜膨出模型中。继续进行主要实验并评估移植后的组织，如果可以分娩，则评估出生后的运动功能以确认治疗效果。