マクロファージ活性化制御による肺線維症およびその急性増悪に対する治療の確立

通过控制巨噬细胞活化建立肺纤维化及其急性加重的治疗方法

基本信息

批准号：
21K16520
负责人：
宮本光
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Osaka Metropolitan University (2022)Osaka City University (2021)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16520/
关键词：
ブレオマイシン LPS マクロファージ肺線維症

项目摘要

7周齢の雄性Wistar ratにブレオマイシン（3mg/kg）を気管内投与、１週間後にLPS（0.15mg/kg）を気管内投与する。LPS投与48時間後に、麻酔下で採血し、血液ガス測定、肺胞マクロファージ採取、肺組織を遺伝子、タンパク発現用に液体窒素で凍結保存、組織学的評価用にホルマリン固定する。本モデルに新規化合物を投与し介入研究を行った。CXCL13mRNAの発現量はLPS気管内投与のみでは24時間後に正常群に比較し4倍に増加するが48時間後には低下する。一方、ブレオマイシンとLPSを気管内投与すると正常群に比較し8倍に上昇し、さらに24〜72時間後にかけて持続することが分かった。また、肺組織中のCCR5遺伝子とIL-10遺伝子の発現をDNA arrayで検証した。CCR5遺伝子とIL-10遺伝子の発現はブレオマイシンとLPS投与群で著明に上昇することが分かった。本モデルに試験化合物を投与し介入研究を行ったが、組織像、血液ガス、各種炎症メディエータに有意な変化は認められなかった。その理由として、試験化合物の投与期間が短く、有効に作用していない可能性が示唆された。そこで7週齢のWistar RatにBLM (3 mg/kg)を気管内投与し、線維化が確立した14日目から低容量のLPS(0.15mg/kg) を3日毎に3回気管内投与し、BLM投与から28日目に犠牲死させるモデルを作成した。BLM投与10日目より試験化合物を開始し、BLM投与から28日目に犠牲死させた(Figure 6)。BLMとLPSによる線維化は試験化合物投与により組織学的に有意に抑制された。さらにcollagen1A1 mRNAの発現もSACによる有意な抑制が認められた。そして、BAL中のマクロファージ数はBLMとLPS投与により増加するが、試験化合物投与により有意に低下することがわかった。

在气管内施用至7圈的雄性Wistar大鼠，一周后，lps（0.15 mg/kg）在弹药内给药。 LPS给药48小时后，在麻醉，血液测量，肺泡巨噬细胞收集，肺组织中收集血液，在液氮中冷冻保存基因和蛋白质表达，以及福尔马林固定进行组织学评估。该模型是通过新颖的化合物和干预研究来管理的。与正常组相比，CXCL13 mRNA的表达水平在24小时后增加了四倍，但48小时后降低。另一方面，与正常组相比，发现博来霉素和LPS增加了8倍，并在24-72小时后持续了持续时间。此外，使用DNA阵列验证了CCR5和IL-10基因在肺组织中的表达。发现博来霉素和LPS处理的组中CCR5和IL-10基因的表达显着增加。干预研究是通过对该模型进行测试化合物进行的，但是在组织学，血液或各种炎症介质中未观察到显着变化。这样做的原因是测试化合物很短，并且可能没有生效。因此，创建了一个模型，在该模型中，将BLM（3 mg/kg）施用到7周龄的Wistar大鼠，从建立纤维化后的第14天开始，低量LPS（0.15 mg/kg）每3天给药3次，牺牲死亡每3天后进行了28天的牺牲。测试化合物是在BLM给药的第10天开始的，在BLM给药的第28天进行了牺牲的死亡（图6）。通过施用测试化合物，BLM和LPS的纤维化在组织学上显着抑制。此外，通过SAC观察到胶原蛋白1a1 mRNA的显着抑制。发现BAL中的巨噬细胞数量随BLM和LP的给药而增加，但随着测试化合物的给药而显着降低。